反芻動(dòng)物消化道寄生蟲病一直是限制畜牧經(jīng)濟(jì)動(dòng)物產(chǎn)能的重要因素。捻轉(zhuǎn)血矛線蟲（Haemonchus contortus）是一種重要的反芻動(dòng)物消化道寄生線蟲,呈世界性分布,主要寄生于牛羊皺胃及小腸,造成宿主貧血及營養(yǎng)不良,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致宿主死亡。由于缺乏可用的疫苗,控制該病主要使用抗蠕蟲藥,但是抗蠕蟲藥無節(jié)制的使用已造成世界范圍的廣泛性的抗藥性的產(chǎn)生。因此,急需尋找新的控制該病的方法。而在分子水平上了解H. contortus生長發(fā)育和繁殖的調(diào)節(jié)機(jī)制可以為開發(fā)新的藥物和候選疫苗找到有潛力的候選靶分子。蛋白酶體是一種高度保守的多亞基酶復(fù)合物,廣泛存在于真核細(xì)胞體內(nèi),能參與多種細(xì)胞的功能,包括調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡,增加抗原的遞呈等。在寄生蟲中,蛋白酶體不僅能參與胞內(nèi)寄生蟲的生長發(fā)育調(diào)節(jié),同時(shí)也參與調(diào)控寄生蟲入侵宿主,對(duì)宿主造成損傷,并可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)其的免疫應(yīng)答。對(duì)蛋白酶體的研究也不斷取得新的成果,在瘧原蟲、阿米巴原蟲、利什曼原蟲、弓形蟲、血吸蟲等寄生蟲中先后報(bào)道蛋白酶體功能機(jī)制,但有關(guān)蛋白酶體在寄生線蟲中的作用依然鮮有報(bào)道。寄生線蟲有效體外培養(yǎng)手段的缺失阻礙了對(duì)研究其基因功能的技術(shù)平臺(tái)的建... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 血矛線蟲病(Haemonchosis)
        1.1.1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲形態(tài)
        1.1.2 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲生活史
        1.1.3 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病致病作用和臨床癥狀
        1.1.4 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病的預(yù)防和治療
    1.2 蛋白酶體(Proteasome)
        1.2.1 泛素-蛋白酶體途徑
        1.2.2 蛋白酶體的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 蛋白酶體的功能
        1.2.4 寄生蟲蛋白酶體的研究進(jìn)展
        1.2.5 蛋白酶體β5亞基
    1.3 秀麗隱桿線蟲及其應(yīng)用
    1.4 RNAi和轉(zhuǎn)基因技術(shù)在動(dòng)物寄生線蟲基因功能研究中的應(yīng)用
        1.4.1 RNAi的機(jī)制
        1.4.2 RNAi在動(dòng)物寄生線蟲中的研究
        1.4.3 RNAi在動(dòng)物寄生線蟲中的應(yīng)用
        1.4.4 轉(zhuǎn)基因技術(shù)動(dòng)物寄生線蟲中的應(yīng)用
2 目的意義
3 材料與方法
    3.1 主要儀器與試劑
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)生物與質(zhì)粒
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要溶液的配制
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲各發(fā)育階段蟲體的收集
        3.2.2 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲基因組DNA的提取
        3.2.3 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲RNA的提取
        3.2.4 PCR產(chǎn)物的電泳檢測與回收
        3.2.5 目的片段的連接
        3.2.6 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        3.2.7 質(zhì)粒DNA的小量制備與鑒定
        3.2.8 質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.9 Hc-pbs-5基因cDNA的獲得
        3.2.10 Hc-pbs-5基因全長gDNA的獲得
        3.2.11 Hc-pbs-5 dsRNA原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.12 Hc-pbs-5種間RNAi
        3.2.13 Hc-pbs-5基因啟動(dòng)子序列的獲得
        3.2.14 基因啟動(dòng)子定位質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.15 顯微注射
        3.2.16 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲各發(fā)育階段轉(zhuǎn)錄水平分析
        3.2.17 Hc-pbs-5基因主要生物信息學(xué)分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 Hc-pbs-5基因cDNA核苷酸序列分析
    4.2 Hc-PBS-5氨基酸序列分析
    4.3 系統(tǒng)進(jìn)化分析
    4.4 Hc-pbs-5基因全長gDNA序列分析
    4.5 Hc-pbs-5基因各個(gè)階段轉(zhuǎn)錄水平分析
    4.6 異源RNA干擾評(píng)價(jià)Hc-pbs-5基因功能
    4.7 Hc-pbs-5基因啟動(dòng)子預(yù)測
    4.8 Hc-pbs-5基因啟動(dòng)子定位研究
5 討論
    5.1 線蟲基因的生物信息學(xué)分析
    5.2 Hc-PBS-5蛋白保守結(jié)構(gòu)域
    5.3 Hc-pbs-5轉(zhuǎn)錄水平分析
    5.4 異源RNA干擾
    5.5 寄生線蟲的反式剪接
    5.6 寄生線蟲異源轉(zhuǎn)基因技術(shù)
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的免疫機(jī)理及控制其感染的營養(yǎng)調(diào)控措施[J]. 鐘榮珍,周道瑋.  動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào). 2013(09)
[2]寄生蟲蛋白酶體的研究進(jìn)展[J]. 陳佳,吳松明,朱興全,黃思揚(yáng).  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(01)
[3]泛素-蛋白酶體途徑的組成及其生物功能[J]. 董合玲,徐曉陽.  南京體育學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2011(03)
[4]寄生線蟲RNA干擾研究進(jìn)展[J]. 賀現(xiàn)輝,朱興全,徐民俊.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(03)
[5]秀麗隱桿線蟲研究綜述[J]. 趙晴,蔣湉湉.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(19)
[6]羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病[J]. 孫莉,李明,盧方琦,盧瑋震.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2009(05)
[7]寄生線蟲功能基因組學(xué)的研究進(jìn)展[J]. 黃翠琴,陳寧,朱興全.  寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報(bào). 2007(02)
[8]泛素-蛋白酶體途徑的組成和功能[J]. 倪曉光,趙平.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2006(03)
[9]牛羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲發(fā)育史和季節(jié)動(dòng)態(tài)研究[J]. 陳清泉,林秀敏.  廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 1982(04)

博士論文
[1]利用秀麗隱桿線蟲表達(dá)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲H11蛋白的轉(zhuǎn)基因研究[D]. 周前進(jìn).浙江大學(xué) 2010

碩士論文
[1]捻轉(zhuǎn)血矛線蟲過氧化物酶基因的克隆和5種蛋白的抗原特性分析[D]. 牛延萍.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3421264