本試驗旨在通過構(gòu)建腺病毒pDC316-LPIN1-eGFP載體并包裝出相應(yīng)的脂素腺病毒顆粒（Ad-LPIN1）,探索LPIN1基因?qū)λＨ橄偕掀ぜ?xì)胞甘油酯和脂肪酸合成的影響。將Ad-LPIN1腺病毒顆粒感染水牛乳腺上皮細(xì)胞,通過實時熒光定量PCR、免疫熒光染色（immunofluorescence,IF）檢測LPIN1基因和lipin1蛋白的表達(dá)情況;通過油紅O染色和甘油三酯測定甘油三酯;通過實時熒光定量PCR檢測LIPN1基因?qū)Ω视腿ズ椭舅岷铣上嚓P(guān)基因表達(dá)的影響。本試驗成功構(gòu)建pDC316-LPIN1-eGFP載體并獲得高質(zhì)量的Ad-LPIN1腺病毒顆粒。Ad-LPIN1腺病毒顆粒感染水牛乳腺上皮細(xì)胞（MOI=50）后LPIN1基因mRNA相對上調(diào)>5 000倍,差異極顯著（P<0.01）,lipin1蛋白表達(dá)量增多且主要在細(xì)胞核中表達(dá)。油紅O染色結(jié)果顯示,過表達(dá)LPIN1基因后細(xì)胞中的脂滴明顯減少。甘油三酯測定結(jié)果顯示,過表達(dá)LPIN1基因后細(xì)胞中甘油三酯含量下降,差異極顯著（P<0.01）。實時熒光定量PCR檢測表明,LPIN1基因過表達(dá)會使過氧化物酶體增殖... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(10)北大核心

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【部分圖文】：

pDC316-LPIN1-eGFP腺病毒載體的構(gòu)建及其腺病毒的包裝和感染

油紅O染色后,Ad-LPIN1試驗組中脂滴較少,而Ad-eGFP對照組中細(xì)胞核周圍環(huán)繞著紅色脂滴,且細(xì)胞呈多角形(圖3A)。檢測細(xì)胞中甘油三酯的含量,Ad-LPIN1試驗組較Ad-eGFP對照組下降了43.63%,差異極顯著(P<0.01);而細(xì)胞上清中甘油三酯的檢測,Ad-LPIN1試驗組較Ad-eGFP對照組略有下降,差異不顯著(P>0.05)(圖3B)。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果說明,相對Ad-eGFP對照組,Ad-LPIN1上調(diào)PPARα、PPARγ、SREBP1基因的表達(dá),分別上調(diào)至2.295倍(P<0.01)、1.155倍(P<0.05)、1.304倍(P<0.01);Ad-LPIN1下調(diào)SCD、FASN、ACSL1、ACACA基因的表達(dá),分別下調(diào)至83.17%、51.30%、44.24%和41.18%(P<0.01,圖3C)。圖3 Ad-LPIN1對水牛乳腺上皮細(xì)胞甘油三酯和脂肪酸合成的影響

Ad-LPIN1對水牛乳腺上皮細(xì)胞甘油三酯和脂肪酸合成的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水牛原代體細(xì)胞慢病毒感染體系的建立[J]. 段安琴,陸杏蓉,馬小婭,梁莎莎,龐春英,梁賢威,鄧廷賢.  中國畜牧獸醫(yī). 2019(10)
[2]水牛乳資源及其理化特性研究進(jìn)展[J]. 謝秉鏘,瓦云超,伍云,黃嘉隷,顧瑞霞.  中國乳品工業(yè). 2018(11)
[3]水牛LPIN1基因克隆及序列分析[J]. 段安琴,龐春英,鄧廷賢,陸杏蓉,馬小婭,梁莎莎,梁賢威.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(10)
[4]水牛乳汁中乳腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定[J]. 段安琴,龐春英,朱鵬,鄧廷賢,陸杏蓉,馬小婭,梁莎莎,梁賢威.  中國畜牧獸醫(yī). 2017(11)
[5]腺病毒載體轉(zhuǎn)染水牛不同原代體細(xì)胞的效果比較[J]. 段安琴,龐春英,朱鵬,陸杏蓉,鄧廷賢,梁賢威.  中國畜牧獸醫(yī). 2016(10)

博士論文
[1]Lipinl參與的細(xì)胞代謝調(diào)控作用研究[D]. 王鑒.華東理工大學(xué) 2018

碩士論文
[1]SREBP1基因在水牛乳腺上皮細(xì)胞中的功能研究[D]. 陳秋明.廣西大學(xué) 2016



本文編號：3412142