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穩(wěn)定表達(dá)乙型腦炎病毒NS2B/NS4B細(xì)胞系的構(gòu)建及其在篩選互作蛋白中的初步應(yīng)用

發(fā)布時(shí)間:2021-09-28 14:04
  日本乙型腦炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)屬于黃病毒科(Flaviviridae)黃病毒屬,是一種典型的嗜神經(jīng)病毒。該病毒主要經(jīng)蚊蟲(chóng)傳播,并嚴(yán)重危害人、畜健康。人類(lèi)發(fā)病后死亡率高,且治愈后往往留下神經(jīng)學(xué)后遺癥。在豬群中,該病毒主要引起妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或木乃伊胎,公豬發(fā)生睪丸炎,育肥豬持續(xù)高熱等,給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。NS2B和NS4B蛋白是JEV的2個(gè)重要的非結(jié)構(gòu)蛋白,它們的功能尚待解答。本研究旨在構(gòu)建能穩(wěn)定表達(dá)NS2B和NS4B蛋白的細(xì)胞系,并在此基礎(chǔ)上,通過(guò)串聯(lián)親和層析(Tandem Affinity Purification,TAP)與質(zhì)譜(Mass spectrometry analysis,MS)技術(shù),篩選可能與它們相互作用的宿主蛋白,從而為深入闡明NS2B和NS4B的功能及其與宿主細(xì)胞相互作用機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。具體研究?jī)?nèi)容如下:1.構(gòu)建細(xì)胞系利用RT-PCR方法擴(kuò)增JEV NS2B和NS4B基因,并將之克隆至帶嘌呤霉素(Puromycin)抗性基因的載體Psin-EF2-MCS-Pur中。然后利用慢病毒載體包裝系統(tǒng),與ps... 

【文章來(lái)源】:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

穩(wěn)定表達(dá)乙型腦炎病毒NS2B/NS4B細(xì)胞系的構(gòu)建及其在篩選互作蛋白中的初步應(yīng)用


圖1.日本乙型腦炎分布圖

穩(wěn)定表達(dá)乙型腦炎病毒NS2B/NS4B細(xì)胞系的構(gòu)建及其在篩選互作蛋白中的初步應(yīng)用


JEV的流行周期Fig.2LifecycleofJapaneseencephalitisvirus

黃病毒科,基因組結(jié)構(gòu)


黃病毒科的分類(lèi)Fig.3ClassificationofFlavivirus

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]豬乙型腦炎病毒LS株的理化特性及其在BHK-21細(xì)胞上增殖特性的研究[J]. 王帥濤,李偉豪,王川慶,劉紅英,王新衛(wèi),常洪濤,魏亞鵬.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2013(03)
[2]慢病毒載體的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J]. 張蕊,龔道清.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2010(06)
[3]流行性乙型腦炎病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 黃麗娟,張海林.  中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2009(08)
[4]慢病毒載體介導(dǎo)綠色熒光蛋白基因在小鼠T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 李振宇,徐開(kāi)林,潘秀英,孫海英,高飛,鹿群先,李德鵬,何徐彭.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2007(01)



本文編號(hào):3412040

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