豬繁殖與呼吸綜合征是一種以臨床表現(xiàn)為豬呼吸障礙、妊娠母豬流產(chǎn)或死胎和小豬高致死率為特征的傳染性疾病,該病是由動(dòng)脈炎病毒科的一種單股正鏈RNA病毒——豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的。該病毒的主要靶細(xì)胞是豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAMs）,同時(shí)PRRSV在單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等細(xì)胞中也可增殖。研究發(fā)現(xiàn)豬唾液酸黏附素（Sialoadhesin,Sn）和CD163共同介導(dǎo)著PRRSV感染豬肺泡巨噬細(xì)胞,其中豬唾液酸黏附素主要在介導(dǎo)PRRSV病毒的黏附和內(nèi)吞中發(fā)揮重要作用。有研究表明,將豬Sn（pSn）、人Sn（hSn）、小鼠Sn（mSn）與豬CD163共轉(zhuǎn)染到PK-15細(xì)胞中,均可以促進(jìn)PRRSV的感染,這說(shuō)明三種受體在介導(dǎo)PRRSV感染細(xì)胞時(shí)物種間的差異并不大,提示這三個(gè)物種的Sn可能共同存在高度保守的功能結(jié)構(gòu)域在介導(dǎo)PRRSV感染中發(fā)揮作用。本研究通過(guò)預(yù)測(cè)豬、人和小鼠三種動(dòng)物源性Sn結(jié)構(gòu)域,找到了具有高度同源性的Sn保守結(jié)構(gòu)域D10。同時(shí),本實(shí)驗(yàn)室以前將豬Sn分為九段進(jìn)行未復(fù)性蛋白的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)和抗體封閉試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn),Sn6（包括結(jié)構(gòu)域D9和D10）可能在PRRSV感染中發(fā)揮重要作用。因此... 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果

圖 3 pET-32a-D9 和 pET-32a-D10 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定g. 3 The double restriction enzyme identification of the pET-32a-D9 and pET-32a-D10 recombinant plaM:蛋白相對(duì)分子量標(biāo)準(zhǔn)；1：pET-32a-D9 雙酶切；2：pET-32a-D10 雙酶切；3：pET-32a 雙酶切M:DL 5000 DNA Marker; 1: Enzyme-digested product of pET-32a-D9; 2: Enzyme-digested product opET-32a-D10; 3: Enzyme-digested product of pET-32a pET32a-D9 和 pET32a-D10 重組蛋白的表達(dá)及純化1 IPTG 最佳誘導(dǎo)濃度當(dāng)摸索 IPTG 的最佳誘導(dǎo)濃度時(shí)，固定誘導(dǎo)時(shí)間為 6h；IPTG 誘導(dǎo)濃度分別為 0.m、0.6Mm、0.8Mm、1.0Mm；誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)束后取等量的培養(yǎng)物制樣，通過(guò) SDS-對(duì)表達(dá)產(chǎn)物中重組蛋白含量進(jìn)行檢測(cè)，如圖可知，兩個(gè)重組蛋白 IPTG 的最佳誘導(dǎo)為 0.6Mm 和 1.0Mm（圖 4）。

圖 3 pET-32a-D9 和 pET-32a-D10 重組質(zhì)粒的 restriction enzyme identification of the pET-32a-D9 a子量標(biāo)準(zhǔn)；1：pET-32a-D9 雙酶切；2：pET-32a-DNA Marker; 1: Enzyme-digested product of pET-32a-DpET-32a-D10; 3: Enzyme-digested product o 和 pET32a-D10 重組蛋白的表達(dá)及純導(dǎo)濃度G 的最佳誘導(dǎo)濃度時(shí)，固定誘導(dǎo)時(shí)間為 6h；、0.8Mm、1.0Mm；誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)束后取等量中重組蛋白含量進(jìn)行檢測(cè)，如圖可知，兩個(gè) 1.0Mm（圖 4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬CD151轉(zhuǎn)基因PK-15細(xì)胞系構(gòu)建及其對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒的易感性[J]. 黃燕燕,郭睿,張鈺,張?chǎng)斡?夏曉莉,孫懷昌.  微生物學(xué)報(bào). 2013(05)
[2]波形蛋白介導(dǎo)豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染Marc-145細(xì)胞作用的初步研究[J]. 王偉偉,張璐,馬曉春,高繼明,肖一紅,周恩民.  病毒學(xué)報(bào). 2011(05)
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[6]豬生殖與呼吸綜合征病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J]. 宋志軍,宋長(zhǎng)緒,楊增岐,朱道中,武占銀,蔣智勇,林志雄,劉燕玲,張福良.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2006(02)
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碩士論文
[1]唾液酸黏附素胞外區(qū)結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備[D]. 張繼希.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]唾液酸近氨基端結(jié)構(gòu)域功能及脂多糖對(duì)PRRSV誘導(dǎo)IFN-α的影響研究[D]. 張志遠(yuǎn).河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]PRRSV GP3和GP4的免疫活性及其在感染細(xì)胞內(nèi)的分布研究[D]. 王中明.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3405880