發(fā)布時間：2021-09-19 01:43

　　動物在自然界生存中會受到各種病菌侵染的威脅,因此動物在長期進化的過程中形成的先天性免疫系統(tǒng)可有效的對抗病原菌的侵染。防御素是一類富含半胱氨酸并廣泛分布于各種動物組織和細(xì)胞的內(nèi)源性陽離子抗菌肽（AMPs）,是先天性免疫系統(tǒng)的重要組成部分。由于防御素具有廣譜的細(xì)菌和病毒抗性,可有效對抗病原菌的侵染,但其所具有的細(xì)胞毒性會對細(xì)胞生長不利,因此對防御素表達(dá)調(diào)控的研究有著重要的意義。之前的研究表明在綿羊發(fā)情期間,其血液雌激素變化同綿羊生殖器官內(nèi)SBD1表達(dá)呈正相關(guān),說明雌激素可能參與綿羊生殖器官內(nèi)SBD1的表達(dá)調(diào)控。進一步研究表明SBD1mRNA在綿羊輸卵管黏膜層上皮細(xì)胞游離面的胞質(zhì)內(nèi)表達(dá),而固有層、肌層、結(jié)締組織中無表達(dá),因此可進行體外雌激素對綿羊輸卵管上皮細(xì)胞內(nèi)SBD1表達(dá)調(diào)控機制的研究,以闡明雌激素對綿羊輸卵管上皮細(xì)胞中SBD1表達(dá)的調(diào)控機制。通過RT-qPCR方法檢測不同劑量17-β雌二醇在不同時間段對SBD1表達(dá)的影響,證實了SBD1表達(dá)量在細(xì)胞添加10-8ME2后6h左右達(dá)到最高。通過RT-qPCR方法檢測細(xì)胞添加10-8M E2后0至10.5h后細(xì)胞內(nèi)SBD1表達(dá)量變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)添... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
插圖和附表清單
縮略語表
1 引言
    1.1 防御素的研究進展
        1.1.1 防御素蛋白結(jié)構(gòu)
        1.1.2 防御素生物學(xué)活性
        1.1.3 防御素的分類及分布
        1.1.4 17-β雌二醇與綿羊β防御素表達(dá)關(guān)系
    1.2 NF-κB信號通路研究進展
        1.2.1 NF-κB信號通路介紹
        1.2.2 NF-κB/Rel和IκB家族蛋白組成和功能
        1.2.3 NF-κB信號通路激活途徑
        1.2.4 NF-κB信號通路的調(diào)節(jié)
        1.2.5 NF-κB信號通路的終止
        1.2.6 染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)
    1.3 本研究的目的及意義
    1.4 技術(shù)路線
2 實驗一 17-β雌二醇對綿羊輸卵管上皮細(xì)胞SBD1表達(dá)的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 儀器設(shè)備
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗方法
    2.2 實驗結(jié)果
        2.2.1 輸卵管上皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)形態(tài)
        2.2.2 輸卵管上皮細(xì)胞總RNA檢測結(jié)果
        2.2.3 輸卵管上皮細(xì)胞不同基因RT-qPCR擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果
        2.2.4 輸卵管上皮細(xì)胞不同基因RT-qPCR擴增效率、擴增、熔解和熔解峰曲線
        2.2.5 輸卵管上皮細(xì)胞不同基因測序結(jié)果
        2.2.6 E_2對綿羊輸卵管上皮細(xì)胞SBD1表達(dá)的影響
        2.2.7 E_2對綿羊輸卵管上皮細(xì)胞Bcl-2和Bax表達(dá)的影響
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
3 實驗二 17-β雌二醇調(diào)控綿羊輸卵管上皮細(xì)胞SBD1基因的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 實驗試劑
        3.1.4 實驗試劑的配置
        3.1.5 實驗方法
    3.2 實驗結(jié)果
        3.2.1 17-β雌二醇調(diào)控SBD1表達(dá)過程中GPR30和雌激素受體的作用
        3.2.2 17-β雌二醇調(diào)控SBD1表達(dá)過程中PKA、PKC和NF-κ B信號通路的的作用
    3.3 討論
        3.3.1 細(xì)胞受體的種類和功能
        3.3.2 17-β雌二醇誘導(dǎo)SBD1的表達(dá)通過GPR30和雌激素受體所介導(dǎo)
        3.3.3 17-β雌二醇誘導(dǎo)SBD1表達(dá)的非基因組途徑需要通過PKA、PKC和NF-κ B信號通路
    3.4 小結(jié)
4 實驗三 NF-κ B信號通路在17-β雌二醇調(diào)控綿羊輸卵管上皮細(xì)胞SBD1基因表達(dá)中的作用
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 儀器設(shè)備
        4.1.3 實驗試劑與試劑配制
        4.1.4 實驗方法
    4.2 實驗結(jié)果
        4.2.1 添加17-β雌二醇后細(xì)胞內(nèi)NF-κ B信號通路中I-κBα蛋白變化
        4.2.2 添加17-β雌二醇后細(xì)胞內(nèi)NF-κ B信號通路中p-I-κ B α蛋白變化
        4.2.3 RT-qPCR方法檢測NF-κ B方法的建立
        4.2.4 添加17-β雌二醇后細(xì)胞內(nèi)NF-κ B表達(dá)量變化
        4.2.5 添加17-β雌二醇后細(xì)胞質(zhì)內(nèi)NF-κB信號通路中p65蛋白變化
        4.2.6 添加17-β雌二醇后細(xì)胞核內(nèi)NF-κ B信號通路中p65蛋白變化
        4.2.7 染色質(zhì)免疫共沉淀實驗步驟質(zhì)量控制檢驗
        4.2.8 RT-qPCR方法檢測SBD1啟動子基因方法的建立
        4.2.9 添加17-β雌二醇后細(xì)胞核內(nèi)NF-κB信號通路中p65蛋白結(jié)合SBD1啟動子基因的變化
    4.3 討論
        4.3.1 NF-κ B信號通路I-κ Bα蛋白發(fā)生泛素化
        4.3.2 NF-κ B信號通路蛋白的磷酸化與脫磷酸化
        4.3.3 p65蛋白發(fā)生核位移并參與SBD1基因的轉(zhuǎn)錄
        4.3.4 NF-κB信號通路的終止
    4.4 小結(jié)
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介



本文編號：3400756