口蹄疫Foot-and-Mouth Disease, FMD);是由口蹄疫病毒Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)引起的一種偶蹄動物的急性、熱性、高度傳染性疾病,一旦暴發(fā)之后給畜牧業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前疫苗接種是控制FMD的最重要措施之一,常用的疫苗是全病毒的滅活疫苗,滅活疫苗雖然在預(yù)防和控制FMD起著重要作用,但在疫苗應(yīng)用當(dāng)中顯出很多不足之處,如純化病毒顆粒難度大,儲存病毒顆粒條件苛刻,疫苗接種后免疫效果不穩(wěn)定等。目前,我國流行的FMD主要以A、O和Asia Ⅰ；型交替出現(xiàn),而且FMDV各型之間幾乎無交叉免疫保護(hù)力,所以單價疫苗在免疫實踐中難以成效。本研究對已經(jīng)構(gòu)建的含有抗原基因SLP和SLP-MultiVP1的原核表達(dá)載體pGEX-SLP和pGEX-SLP-MultiVPl進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá),對獲得含有GST標(biāo)簽蛋白的GST-SLP和GST-SLP-MultiVP1合蛋白,利用（?）ierce（?） GST Spin Purification Kit:親和層析和氯化鋰沉淀法進(jìn)行純化并將純化結(jié)果進(jìn)行比較。采用各型FMDV如A、O和Asia Ⅰ型... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

GST-SLP融合蛋白的表達(dá)以及它的表達(dá)形式分析結(jié)果

乳桿菌重組S-層蛋白的純化及各型FMDV表位嵌入的實效性鑒定GST-SLP-MuItiVPI融合蛋白的表達(dá)及其表達(dá)形式用SDS-PAGE分析結(jié)果可見，重組菌樣經(jīng)O.lmM/LIPTG,誘導(dǎo)培養(yǎng)3hkDa處出現(xiàn)了可疑蛋白條帶（如圖2所示），而未誘導(dǎo)的對照樣則未條帶。理論上GST標(biāo)簽蛋白分子量約為26kDa，目的蛋白SLP-MultiVkDa，二者融合大小應(yīng)為80kDa。因此實際表達(dá)結(jié)果與預(yù)期融合蛋白導(dǎo)表達(dá)的菌樣，既定條件進(jìn)行超聲破碎菌體后，經(jīng)SDS-PAGE分析上清還是沉淀中均有目的條帶分布，表明融合蛋白以部分可溶性蛋是大部分以包涵體的形式表達(dá)（如圖2所示）。

按2.2.1和2.2.2方法進(jìn)行大量誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白后，收集菌體沉淀，經(jīng)2.2:5方法獲得的純化的蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE分析（如圖3所示）。結(jié)果表明：在71kDa (泳道1)和80kDa (泳道2)處顯示出有一條優(yōu)勢蛋白條帶。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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