羊口瘡（Orf）是一種急性、高度接觸性傳染病,對(duì)綿羊和山羊等小反芻經(jīng)濟(jì)動(dòng)物健康養(yǎng)殖影響較大,引發(fā)該病的病原是羊口瘡病毒（Orf virus,ORFV）。常規(guī)ORFV檢測(cè)方法,如間接ELISA、PCR、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等,在Orf的流行病學(xué)調(diào)研、病原特性和病毒鑒定等方面的研究中發(fā)揮了極其重要的作用,但難以滿足對(duì)感染組織器官和細(xì)胞中的ORFV抗原進(jìn)行定位和直觀判斷的試驗(yàn)?zāi)康�。間接免疫熒光（IFA）可特異、直觀地檢出組織細(xì)胞上的病毒抗原,在細(xì)胞水平對(duì)抗原進(jìn)行定位,因此獲得理化性狀均一,結(jié)合抗原特異性強(qiáng)的ORFV的單抗,對(duì)于病毒的實(shí)驗(yàn)室研究和診斷等深入探究具有重要的價(jià)值。本研究以羊口瘡疑似組織病料為材料,采用PCR、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等,對(duì)臨床樣品進(jìn)行了檢測(cè)和ORFV分離鑒定;以接種了ORFV的牛睪丸上皮細(xì)胞為檢測(cè)標(biāo)本,未經(jīng)亞克隆化的ORFV雜交瘤細(xì)胞為材料,采用有限稀釋法、間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）,篩選分泌抗ORFV單抗的雜交瘤細(xì)胞,并對(duì)其進(jìn)行鑒定。ORFV陽性山羊口唇部組織,制備冰凍組織切片,用經(jīng)過鑒定的ORFV單抗進(jìn)行IFA試驗(yàn)檢測(cè)。本研究獲得如下結(jié)果:1.從臨床羊口瘡疑似病料中分離出了一株羊口... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 羊口瘡研究進(jìn)展
        1.1 病原學(xué)及基因組
        1.2 流行病學(xué)特征
        1.3 病毒毒力因子與宿主免疫逃避
        1.4 ORFV感染宿主的免疫應(yīng)答
        1.5 實(shí)驗(yàn)室診斷
            1.5.1 顯微鏡檢查
            1.5.2 血清學(xué)檢測(cè)
            1.5.3 分子實(shí)驗(yàn)
        1.6 羊口瘡病毒單抗研究進(jìn)展
        1.7 本研究的目的及意義
試驗(yàn)研究
    第二章 羊口瘡病毒鳳翔株的分離和鑒定
        2.1 材料
            2.1.1 病料來源
            2.1.2 細(xì)胞與菌株
            2.1.3 主要試劑和材料
            2.1.4 主要儀器
            2.1.5 主要試劑的配置
        2.2 方法
            2.2.1 病料的處理
            2.2.2 引物設(shè)計(jì)
            2.2.3 DNA的提取
            2.2.4 PCR檢測(cè)
            2.2.5 牛睪丸上皮細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.2.6 羊口瘡病毒的接種
            2.2.7 ORFV的鑒定
            2.2.8 B2L基因序列分析與進(jìn)化樹的繪制
            2.2.9 TCID50 的測(cè)定
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 Orf疑似病料PCR檢測(cè)結(jié)果
            2.3.2 ORFV感染牛睪丸上皮細(xì)胞的病變觀察
            2.3.3 ORFV的 PCR檢測(cè)結(jié)果
            2.3.4 菌液PCR結(jié)果
            2.3.5 PCR產(chǎn)物序列測(cè)定結(jié)果
            2.3.6 B2L基因的系統(tǒng)發(fā)育分析
            2.3.7 羊口瘡病毒TCID50 測(cè)定結(jié)果
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 羊口瘡病毒單抗雜交瘤細(xì)胞的IFA篩選與鑒定
        3.1 材料
            3.1.1 細(xì)胞株
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 主要儀器
            3.1.4 試劑配制
        3.2 方法
            3.2.1 雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇與傳代
            3.2.2 間接免疫熒光法檢測(cè)羊口瘡病毒抗體方法的優(yōu)化
            3.2.3 陽性雜交瘤細(xì)胞的篩選
            3.2.4 ORFV單克隆抗體類別鑒定
            3.2.5 Western blot檢測(cè)
            3.2.6 組織冰凍切片的免疫熒光染色
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 ORFV感染細(xì)胞培養(yǎng)樣品的IFA檢測(cè)時(shí)間優(yōu)化結(jié)果
            3.3.2 ORFV接種滴度優(yōu)化結(jié)果
            3.3.3 熒光二抗最適工作濃度優(yōu)化結(jié)果
            3.3.4 ORFV單抗陽性雜交瘤細(xì)胞的篩選結(jié)果
            3.3.5 抗體類別鑒定結(jié)果
            3.3.6 ORFV的純化
            3.3.7 Western blot鑒定
            3.3.8 組織中羊口瘡病毒的間接免疫熒光檢測(cè)
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[5]羊傳染性膿皰病病毒膠體金快速診斷試紙條的研制[D]. 畢經(jīng)影.吉林大學(xué) 2015
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