發(fā)布時(shí)間：2021-09-02 17:27

　　PCV2是圓環(huán)病毒科家族成員之一,無(wú)囊膜,單股環(huán)狀DNA病毒�；蛉L(zhǎng)1767-1768bp。在其反義方向有兩個(gè)主要的開放閱讀框。ORF1編碼其復(fù)制蛋白（Rep）,ORF2編碼其衣殼蛋白（Cap）,含有免疫顯性的抗原表位[l]。PCV2在世界范圍內(nèi),不管家豬還是野豬中普遍流行,引起一系列與PCV2相關(guān)的疾病綜合癥,即圓環(huán)病毒相關(guān)�。≒CVAD）。如仔豬斷奶綜合癥（PMWS）、皮炎腎病綜合癥（PDNS）和繁殖障礙等。給養(yǎng)豬行業(yè)帶來(lái)巨大的影響。預(yù)防該病毒感染的最有效方法就是疫苗免疫�；赑CV2給世界整個(gè)養(yǎng)豬行業(yè)所帶來(lái)的損失,對(duì)該病毒進(jìn)行研究迫在眉睫,對(duì)控制、預(yù)防和治療PCVAD具有很大意義。為了解PCV2的致病機(jī)理及其分子生物學(xué)特性,對(duì)鄭州、焦作兩地疑似PCV2感染的豬淋巴結(jié)、脾臟和肺臟組織進(jìn)行PCR檢測(cè),對(duì)檢測(cè)為陽(yáng)性的病料進(jìn)行PCV2分離,利用間接免疫熒光試驗(yàn)和PCR擴(kuò)增進(jìn)行初步鑒定,將獲得的全基因組進(jìn)行克隆、測(cè)序,用DNAStar對(duì)克隆的序列與GenBank上獲取的其它PCV2全基因組進(jìn)行序列分析。分離到兩株病毒,命名為HZ-09株和JIAOZ-12株。經(jīng)間接免疫熒光試驗(yàn)可見感染病毒... 

【文章來(lái)源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
文獻(xiàn)綜述
    1 病原學(xué)
    2 流行病學(xué)
        2.1 地理分布
        2.2 易感物種
        2.3 PCV2感染途徑
        2.4 排放途徑
    3 發(fā)病機(jī)理
    4 臨床癥狀及病變
        4.1 斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征(PMWS)
        4.2 豬皮炎和腎病綜合征(PDNS)
        4.3 PCV2相關(guān)的肺炎
        4.4 PCV2相關(guān)的繁殖疾病
        4.5 PCV2相關(guān)的腸炎
        4.6 PCV2相關(guān)的神經(jīng)疾病
        4.7 PCV2亞臨床感染
    5 PCV2檢測(cè)方法
        5.1 病毒的檢測(cè)
            5.1.1 病毒抗原檢測(cè)
            5.1.2 基因組檢測(cè)
        5.2 病毒抗體檢測(cè)
            5.2.1 間接免疫熒光試驗(yàn)(Immunofluorescence assay,IFA)
            5.2.2 免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)
            5.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)
    6 目前商業(yè)PCV2疫苗
        6.1 試驗(yàn)感染模式中疫苗的效果
        6.2 接種方案
            6.2.1 疫苗在垂直傳播上的功效
            6.2.2 母豬的接種
            6.2.3 生長(zhǎng)豬的免疫
引言
試驗(yàn)一 PCV2河南株的分離鑒定及全基因組序列分析
    1 材料和方法
        1.1 試驗(yàn)材料
        1.2 引物設(shè)計(jì)
        1.3 病料處理
        1.4 病料PCV2的檢測(cè)
        1.5 病毒的分離與培養(yǎng)
        1.6 PCV2的間接免疫熒光鑒定
        1.7 PCV2全基因組的PCR擴(kuò)增
        1.8 PCV2全基因組序列的測(cè)定與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 樣品PCR檢測(cè)結(jié)果
        2.2 PCV2的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果
        2.3 熒光染色鑒定結(jié)果
        2.4 細(xì)胞毒中PCV2基因組擴(kuò)增結(jié)果
        2.5 序列的測(cè)定及分析
    3 結(jié)論與討論
試驗(yàn)二 PCV2河南分離株增殖條件的優(yōu)化
    1 材料與方法
        1.1 病毒和細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 IFA反應(yīng)條件的選擇
            1.3.1 PCV2抗血清的工作濃度
            1.3.2 兔抗豬IG-g-FITC的工作濃度
        1.4 PCV2增殖條件的優(yōu)化
            1.4.1 D-氨基葡萄糖的最佳濃度
            1.4.2 最佳收毒時(shí)間的確定
        1.5 PCV2傳代增殖
        1.6 TCID50測(cè)定
    2 結(jié)果與分析
        2.1 IFA反應(yīng)條件的優(yōu)化
            2.1.1 PCV2抗血清最佳稀釋度
            2.1.2 二抗最佳稀釋度
        2.2 PCV2增殖條件的優(yōu)化
            2.2.1 D-氨基葡萄糖的最佳刺激濃度
            2.2.2 病毒培養(yǎng)最佳時(shí)間
        2.3 PCV2增殖情況
        2.4 病毒效價(jià)的測(cè)定
    3 結(jié)論與討論
試驗(yàn)三 PCV2增殖敏感PK15細(xì)胞的克隆與篩選
    1 材料與方法
        1.1 PK15細(xì)胞
        1.2 PK15細(xì)胞克隆
        1.3 PCV2增值易感PK15克隆細(xì)胞篩選
        1.4 間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)
        1.5 克隆細(xì)胞PCV1的檢測(cè)
        1.6 PK15細(xì)胞的傳代、凍存與復(fù)蘇
        1.7 病毒TCID50測(cè)定
        1.8 L8對(duì)PCV2增殖穩(wěn)定性檢測(cè)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 細(xì)胞克隆與PCV2 IFA檢測(cè)
        2.2 PCV1檢測(cè)結(jié)果
        2.3 L8克隆PK15細(xì)胞培養(yǎng)PCV2毒株TCID50測(cè)定
        2.4 克隆細(xì)胞傳代、凍存與復(fù)蘇
        2.5 L8對(duì)PCV2增殖的穩(wěn)定性
    3 結(jié)論與討論
附錄
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
abstract
攻讀碩士期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3379427