白細(xì)胞介素-2（interleukin-2, IL-2）是一種免疫增強(qiáng)劑,在機(jī)體抗感染、抗腫瘤等方面發(fā)揮重要作用。但I(xiàn)L-2具有毒副作用,臨床應(yīng)用效果受到一定影響。科學(xué)家一直致力于通過其結(jié)構(gòu)的改變,減少副作用。本實(shí)驗(yàn)室苗利光博士等研制出一種修飾性人白細(xì)胞介素2（mhIL-2）,通過修飾IL-2的氨基酸序列,使修飾后的IL-2失去與CD25亞基的結(jié)合能力,顯著提升了IL-2免疫增強(qiáng)作用。本試驗(yàn)利用BSM鹽培養(yǎng)基,對(duì)含有IL-2基因的GS115畢赤酵母菌工程菌進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵表達(dá)研究。發(fā)現(xiàn)pH值4.8、甲醇濃度3.5%、溫度27℃時(shí)發(fā)酵效果最好,經(jīng)過72h誘導(dǎo)表達(dá),可在發(fā)酵上清中得到高劑量的mhIL-2,經(jīng)SDS-PAGE和hIL-2ELISA方法檢測(cè),mhIL-2含量占上清中總蛋白的27%,其含量為0.84mg/mL。采用AKTA蛋白純化儀,利用離子交換層析和凝膠過濾層析方法,對(duì)mhIL-2大規(guī)模發(fā)酵表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離純化研究,依次經(jīng)過乙酸鈉-乙酸緩沖體系離子交換法和乙酸鈉-氯化鎂緩沖液凝膠過濾脫鹽,SDS-PAGE和凝膠成像系統(tǒng)分析發(fā)現(xiàn)mhIL-2的純度為95%。通過CTLL-2細(xì)胞株和M... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同發(fā)酵時(shí)間表達(dá)產(chǎn)物SDS-PAGE分析

第3種緩沖液凝膠過濾結(jié)果

7純化樣品SDS-PAGE電泳Fig3.7SDS-PAGEofpurifiedsample

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]畢赤酵母高效表達(dá)策略概述[J]. 陸永超,蔣琳.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2013(01)
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博士論文
[1]畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)及其應(yīng)用[D]. 郭雨剛.中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]CD25結(jié)合位點(diǎn)修飾性hIL-2在畢赤酵母中的表達(dá)及活性鑒定[D]. 王松.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[2]不同飼養(yǎng)方式下奶牛血液生化指標(biāo)測(cè)定與分析[D]. 宋平.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3377807