發(fā)布時間：2021-08-31 08:11

　　雞壞死性腸炎（Necrotic enteritis, NE）義稱雞腸毒血.癥,是由A或C型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起雞的一種以小腸后段腸管增粗和黏膜壞死為病變特征的急性細(xì)菌性傳染病,對全球家禽生產(chǎn)造成重大的經(jīng)濟(jì)影響。本試驗選擇產(chǎn)氣家膜梭菌兩個關(guān)鍵致病因子a毒素/磷脂酶C（a-toxin/plc）和壞死性腸炎毒素B（NetB）為抗原,構(gòu)建產(chǎn)氣莢膜梭菌plc和NetB毒素基因重組植物乳酸桿菌,通過乳酸菌可表達(dá)和傳遞外源抗原以及乳酸菌本身可在腸道定植的特性,有效刺激腸道黏膜免疫系統(tǒng),進(jìn)行雞產(chǎn)氣家膜梭菌新型疫苗保護(hù)機(jī)制的研究。本文利用植物乳酸菌穿梭載體pSIP409構(gòu)建重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB,經(jīng)雙酶切鑒定和序列測定正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）并進(jìn)行SppIP誘導(dǎo)表達(dá).Western Blot證明重組蛋白表達(dá)成功,并且主要以包涵體形式存在,plc和NetB重組蛋白相對分子質(zhì)量分別為40kDa和36kDa。重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB分別電轉(zhuǎn)化植物乳桿菌NC8細(xì)胞,PCR和雙酶切鑒定正確后進(jìn)行SppIP誘導(dǎo)表達(dá)。Western Blot和... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 雞壞死性腸炎
        1.1.1 病原及相關(guān)毒力因子
        1.1.2 雞壞死性腸炎誘發(fā)因素
        1.1.3 雞壞死性腸炎流行特點
        1.1.4 雞壞死性腸炎的臨床癥狀
        1.1.5 雞壞死性腸炎病理變化
    1.2 雞壞死性腸炎疫苗的研究進(jìn)展
        1.2.1 類毒素疫苗
        1.2.2 弱毒疫苗
        1.2.3 基因工程疫苗
    1.3 乳酸菌作為口服疫苗傳遞載體研究進(jìn)展
        1.3.1 乳酸菌對機(jī)體免疫作用的影響
        1.3.2 乳酸菌作為口服疫苗傳遞載體的應(yīng)用前景
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 菌株及質(zhì)粒
        2.1.3 培養(yǎng)基和主要試劑
        2.1.4 主要試劑配制
        2.1.5 儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 表達(dá)產(chǎn)氣莢膜梭菌plc和NetB蛋白重組質(zhì)粒的構(gòu)建 #
        2.2.2 重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB鑒定
        2.2.3 重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.4 重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB在植物乳桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.5 產(chǎn)氣莢膜梭菌plc和NetB基因重組植物乳桿菌的免疫保護(hù)試驗
3 結(jié)果
    3.1 PCR擴(kuò)增plc基因與NetB基因
    3.2 重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB鑒定
        3.2.1 重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB PCR鑒定
        3.2.2 重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB雙酶切鑒定
        3.2.3 重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB序列測定
    3.3 重組蛋白在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.3.1 重組plc蛋白在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.3.2 重組NetB蛋白在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
    3.4 重組蛋白在植物乳桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.4.1 表達(dá)plc/NetB重組植物乳桿菌PCR鑒定
        3.4.2 表達(dá)plc/NetB重組植物乳桿菌Western Blot鑒定
        3.4.3 表達(dá)plc/NetB重組植物乳桿菌間接免疫熒光鑒定
    3.5 重組植物乳桿菌的免疫保護(hù)效果
        3.5.1 重組植物乳桿菌在免疫雞腸道定植情況
        3.5.2 雛雞免疫后抗產(chǎn)氣莢膜梭菌plc、NetB抗體動態(tài)變化
        3.5.3 雛雞攻菌后抗產(chǎn)氣莢膜梭菌plc、NetB抗體動態(tài)變化
        3.5.4 重組植物乳桿菌免疫雛雞攻菌后細(xì)菌計數(shù)
        3.5.5 重組植物乳桿菌免疫雛雞攻菌后病理剖檢變化
        3.5.6 重組植物乳桿菌免疫雛雞攻菌后病理組織學(xué)變化
        3.5.7 重組植物乳桿菌免疫雛雞攻菌后腸道病變評分
        3.5.8 重組物乳桿菌免疫及攻菌對雛雞體重的影響
        3.5.9 重組植物乳桿菌免疫菌對雛雞免疫器官發(fā)育的影響
4 討論
    4.1 重組質(zhì)粒pSIP409-plc和pSIP409-NetB的構(gòu)建
    4.2 重組蛋白plc與NetB在大腸桿菌和乳酸菌中的表達(dá)
    4.3 重組植物乳標(biāo)菌抗產(chǎn)氣莢膜梭菌感染免疫效果
        4.3.1 免疫雛雞攻兇后產(chǎn)氣莢膜梭菌兇plc、NetB抗體動態(tài)變化
        4.3.2 免疫雞攻菌后機(jī)體病理損傷、細(xì)菌定植變化
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3374545