本研究建立了飼料中沙門(mén)菌的快速檢測(cè)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR方法，進(jìn)行了飼料中沙門(mén)菌的分離與鑒定，開(kāi)展了沙門(mén)菌飼料分離株與活禽分離株耐藥性比對(duì)及飼料分離株致病性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。我國(guó)飼料中沙門(mén)菌的檢測(cè)一直應(yīng)用傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法檢測(cè)，該方法檢測(cè)周期長(zhǎng)約5～7天，且操作步驟繁瑣，應(yīng)用試劑種類繁多，對(duì)疑似菌落的選取主觀判斷性強(qiáng)，易出現(xiàn)漏檢，對(duì)檢測(cè)人員技術(shù)水準(zhǔn)要求較高。本研究以沙門(mén)菌菌屬特異性基因invA基因?yàn)槟康幕颍梅肿由飳W(xué)方法，建立了飼料中沙門(mén)菌的PCR檢測(cè)技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)，克服了上述缺陷，將檢測(cè)時(shí)間縮短至48小時(shí)，同時(shí)具有特異性好，靈敏度高，無(wú)假陰性，可操作性強(qiáng)，檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn)。PCR檢測(cè)方法對(duì)飼料中沙門(mén)菌的檢出限可達(dá)1～3CFU/25g，可檢測(cè)的最低菌液濃度為3.2～4.0×102CFU/mL。本課題研究的PCR檢測(cè)方法已通過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)的評(píng)審，現(xiàn)成為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，于2012年11月正式發(fā)布實(shí)施（國(guó)標(biāo)號(hào)為GB/T28642-2012）。在2008～2012年，我們對(duì)采自遼寧省的1221批飼料樣品進(jìn)行了沙門(mén)菌檢測(cè)，同時(shí)應(yīng)用本研究中建立的PCR方法和傳統(tǒng)微生物方法檢測(cè)，兩種方法檢... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

沙門(mén)菌參考菌株invA基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)結(jié)果

PCR產(chǎn)物酶切瓊脂糖凝膠電泳

烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)（圖結(jié)果相符。4 3 2 1 1-2 PCR 產(chǎn)物酶切瓊脂糖凝膠電CR products enzyme agarose gel elec2.PCR 產(chǎn)物；3. MLuI 酶切產(chǎn)物；3 2 1

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]沙門(mén)氏菌入侵基因研究進(jìn)展[J]. 黃冠軍,劉天強(qiáng),楊曉玲,彭衡陽(yáng),肖丹.  亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥. 2013(11)
[2]飼料中沙門(mén)氏菌的檢測(cè)及其在肉骨粉中的生長(zhǎng)特性研究[J]. 饒正華,王宏,張?zhí)K,肖志明.  農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全. 2013(04)
[3]禽源大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的分離鑒定與耐藥性檢測(cè)[J]. 李淑芳,曹慧,黃燕霞,陳冬杰,鄒海鵬,遲明飛,陳偉垣,謝文斌.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2013(07)
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[5]飼料原料及濃縮料、配合料中沙門(mén)氏菌的分離鑒定與分析[J]. 阿力騰才斯克.  新疆畜牧業(yè). 2013(03)
[6]沙門(mén)氏菌檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 張江英.  家禽科學(xué). 2012(10)
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[8]減少豬群中沙門(mén)氏菌感染從飼喂干凈的飼料開(kāi)始[J]. 翁善鋼.  飼料廣角. 2012(16)
[9]沙門(mén)氏菌熱裂解氣相色譜-質(zhì)譜法研究[J]. 董海燕.  針織工業(yè). 2012(06)
[10]抗生素誘導(dǎo)對(duì)沙門(mén)氏菌耐藥譜型變化的影響[J]. 陳朝喜,杜雄偉.  西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(03)

博士論文
[1]沙門(mén)氏菌快速檢測(cè)體系的建立與應(yīng)用及其耐藥性分析研究[D]. 孔繁德.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3373374