食欲素A（orexin A）作為一種重要的神經肽類激素,通過與G蛋白耦聯(lián)受體結合影響生殖功能。為了研究orexin A對綿羊黃體化顆粒細胞基因表達的影響及其信號網(wǎng)絡,培養(yǎng)綿羊卵巢黃體化顆粒細胞進行鑒定,提取黃體化顆粒細胞組和添加Orexin A的黃體化顆粒細胞組的RNA,采用lllumina測序技術進行測序,利用生物信息學方法對轉錄組數(shù)據(jù)進行分析,在測序數(shù)據(jù)質量控制的基礎上,對差異表達的基因進行篩選、功能注釋和富集分析。結果表明,黃體化顆粒細胞組的孕酮分泌量顯著高于未黃體化顆粒細胞組;轉錄組測序共獲得了50個差異基因,其中上調表達20個,下調30個;發(fā)現(xiàn)多個與細胞周期調控、繁殖及代謝相關的高表達基因,如PRRT2、ID1、RRM2、ATP6、ATP8、KIRREL、SOX4、TBX3等基因,結合GO分析和KEGG通路分析表明,差異基因主要參與代謝途徑、氧化磷酸化、癌癥信號通路、GnRH信號通路、cGMP-PKG信號通路、Rap1信號通路、Wnt信號通路以及Ca離子信號通路等。本試驗為進一步闡明orexin A影響綿羊的生殖調控提供了依據(jù)。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)學報. 2020,40(05)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

綿羊卵巢黃體化顆粒細胞鑒定

表3 添加orexin A上、下調前10位的基因 基因 FLE-1ctrlFPKM FLE-2ctrlFPKM FLE-3ctrlFPKM Ore-A-1caseFPKM Ore-A-2caseFPKM Ore-A-3caseFPKM 上調 ATP6 3 807.43 10 912.09 11 674.51 11 684.87 14 103.26 25 859.59 ND4 1 330.32 4 385.25 6 331.00 4 017.49 6 688.66 16 840.97 ND1 1 343.91 3 194.67 4 536.10 3 240.76 5 259.64 12 618.19 ND2 1 334.63 2 250.28 3 545.24 2 618.19 4 381.46 12 277.03 ATP8 640.65 2 146.63 6 302.27 2 972.00 7 304.28 20 052.39 UCP2 15.76 36.01 21.12 20.66 49.02 23.20 LOC101104471 11.24 1.27 9.53 1.44 18.17 71.89 ADCY7 5.06 5.90 3.70 6.00 5.71 4.97 DNAJC30 1.12 1.56 2.24 2.76 5.94 3.26 IL6R 0.69 1.57 1.07 1.30 1.12 1.83 下調 LOC101110546 1 427.01 1 959.08 458.65 89.20 17.99 90.80 LOC105611998 1 275.62 652.55 353.48 551.86 427.25 403.92 LOC101120606 1 010.76 394.92 235.08 356.77 266.88 299.63 LOC105604154 1 154.30 336.06 201.74 288.95 298.18 224.41 ANP32B 538.12 183.53 134.21 194.60 145.37 80.80 RDX 395.50 111.88 57.22 117.90 65.49 57.90 APRT 200.38 65.66 41.71 68.70 41.83 45.07 PSIP1 121.29 41.89 27.98 48.11 31.33 24.54 SLU7 91.03 40.04 27.23 39.08 25.74 20.99 PARD3B 95.66 34.31 17.99 32.92 16.32 15.21圖3 差異基因 KEGG 富集分析結果

圖2 添加orexin A的黃體化顆粒細胞組與對照組基因表達比較 紅色點表示上調表達,綠色點表示下調表達,藍色點表示表達量無明顯變化在上調基因中,線粒體基因中ND1和ND2基因直接參與氫與電子傳遞,并通過氧化磷酸化產生ATP,參與能量代謝調節(jié)[7];ND2基因表達下降導致復合物Ⅰ酶活性的改變,影響卵子的活力,從而影響卵子的受精[8];ATP6和ATP8是呼吸鏈傳遞過程中不可或缺的部分,ATP6和ATP8基因相鄰分布,ATPase是生物體內廣泛存在于細胞膜上的一種極為重要的酶,其功能主要是維持細胞內外離子滲透壓和跨膜電化學平衡以及細胞能量代謝[9-11];ATP6、ATP8、ND4和ND6等基因缺失使線粒體呼吸鏈上主要的酶不能轉錄和表達,引起呼吸復合物在分子裝配上受到損害,使細胞內能量產生減少從而導致卵巢老化,使卵巢功能下降[12-13],受精卵著床、胚胎發(fā)育以及產乳等均離不開黃體化顆粒細胞線粒體的成熟、再分配、產生以及能量積累。編碼的富脯氨酸跨膜蛋白2(PRRT2)又名PKC,參與GnRH信號通路、Wnt信號通路、cGMP-PKG 信號通路、NF-kappa B 信號通路、Rap1 信號通路和Ca離子信號通路,能夠在第二信使的調節(jié)下參與卵巢黃體化顆粒細胞的生理功能。RRM2參與P53信號通路,調控細胞的增殖和凋亡。KIRREL存在于不同的卵巢細胞中,在顆粒細胞中表達較高,在培養(yǎng)的顆粒細胞中,KIRREL的下調導致類固醇激素分泌下降,KIRREL與顆粒細胞中MAPK1/3和MAPK14磷酸化的快速增加致使細胞增殖[14]。因此,KIRREL是一種與生殖有關的潛在代謝信使。推測KIRREL可能通過MAPK信號通路對黃體化顆粒細胞產生影響。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3373393