流行性感冒（簡稱流感）是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染疾病,傳播迅速且極易造成大規(guī)模爆發(fā)與流行,而接種疫苗是預(yù)防流感病毒傳播的主要措施。近年來隨著全球流感防控能力建設(shè)的加快以及對流感疫苗產(chǎn)品質(zhì)量需求的提高,國外已有基于不同類型細胞基質(zhì)的流感疫苗相繼獲批上市,而國內(nèi)的流感疫苗還仍然完全依賴于雞胚進行生產(chǎn),目前MDCK細胞基質(zhì)流感疫苗是國內(nèi)疫苗研發(fā)的主要方向,但在細胞基質(zhì)流感疫苗研發(fā)中有關(guān)病毒感染細胞機制的研究較少。本研究以MDCK細胞與H3N2型流感病毒株（NYMCX-223A）為研究對象,應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)、免疫熒光染色、實時熒光定量PCR、蛋白免疫印跡分析篩選出了MDCK細胞在感染H3N2型流感病毒株過程中的差異表達蛋白,為深入了解MDCK細胞與A型流感病毒的互作機制奠定了基礎(chǔ),獲得以下研究結(jié)果:1.通過iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)測定未感染和以MOI=1的H3N2型流感病毒感染12h的MDCK細胞中的蛋白質(zhì),共鑒定出374種差異表達蛋白質(zhì),其中表達量上調(diào)的差異表達蛋白質(zhì)有51種,表達量下調(diào)的差異表達蛋白質(zhì)有323種。2.通過對iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)、GO富集與KEGG富... 

【文章來源】：西北民族大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

A型流感病毒結(jié)構(gòu)簡圖

4合，使流感病毒吸附于宿主細胞表面。唾液酸受體分為α-2,3型和α-2,6型兩種半乳糖苷受體[48]，α-2,3型半乳糖苷受體與人源流感病毒HA結(jié)合，主要存在于人類上呼吸道；α-2,6型半乳糖苷受體與禽流感病毒HA結(jié)合，廣泛存在于人類下呼吸道及禽類胃腸道[49]。A型流感病毒的HA蛋白易發(fā)生突變，從而導(dǎo)致流感病毒與唾液酸受體的結(jié)合方式也隨之發(fā)生改變，也有研究表明一些A型流感病毒可同時與α-2,3型和α-2,6型兩種唾液酸半乳糖苷受體結(jié)合[50]。（FromZhangJiantao,etal.2019）圖1-2流感病毒復(fù)制周期示意圖Fig.1-2Replicationcycleofaninfluenzavirus流感病毒吸附于宿主細胞表面后，經(jīng)內(nèi)吞作用侵入宿主細胞，然后被網(wǎng)格蛋白包裹形成初級內(nèi)體。初級內(nèi)體在向細胞核靠近過程中被酸化形成次級內(nèi)體，而次級內(nèi)體中的低pH使流感病毒HA蛋白構(gòu)象發(fā)生改變，導(dǎo)致流感病毒包膜與內(nèi)體膜融合，從而使流感病毒在細胞質(zhì)中完成脫殼。在流感病毒脫殼過程中，離子通道蛋白M2被激活并使流感病毒內(nèi)部酸化，流感病毒RNP復(fù)合物與基質(zhì)蛋白M1分離后被轉(zhuǎn)運至細胞核中進行流感病毒RNA的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制[51]。流感病毒RNP復(fù)合物在進入細胞核后，通過RNA聚合酶復(fù)合體加工轉(zhuǎn)錄形成流感病毒mRNA，其過程大致為PB2識別宿主細胞mRNA帽子結(jié)構(gòu)并與之結(jié)

101.3流感病毒感染激活的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是指細胞外的信號分子經(jīng)細胞膜傳遞信息至細胞內(nèi)發(fā)揮效應(yīng)的一系列酶促反應(yīng)通路，大量研究表明病毒在宿主細胞中的復(fù)制與增殖都依賴于細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，病毒在感染細胞后將刺激信號傳遞至細胞核內(nèi)，啟動遺傳物質(zhì)復(fù)制和蛋白質(zhì)合成功能，通過合成與病毒相關(guān)的蛋白以此調(diào)控病毒復(fù)制。流感病毒感染細胞改變了許多涉及細胞重要生理功能的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，目前已確定流感病毒感染細胞可激活PI3K/Akt、NF-κB、PKC/PKR、TLR/RIG-1和MAPK等五種細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[70]，如圖1-3所示。這些信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響流感病毒的侵入、復(fù)制、增殖及凋亡等流感病毒生命周期過程，同時還參與宿主細胞抗病毒免疫應(yīng)答過程[71-78]。（FromGaurPratibha,etal.2011）圖1-3流感病毒感染細胞激活的信號通路Fig.1-3HostcellmachinerygetsactivatedduringinfluenzainfectionandleadstotriggerSignalingpathways.1.3.1PI3K/Akt通路PI3K是磷脂酰肌醇-3-激酶的簡稱，廣泛存在于各種細胞中，其功能主要為

【參考文獻】：
期刊論文
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