天然免疫是宿主抵抗病毒入侵的第一道防線,病毒核酸可以被模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors,PRRs）識(shí)別,活化轉(zhuǎn)錄因子IRF3,IRF3被激活后發(fā)生磷酸化和二聚化后入核,進(jìn)而形成有活性的轉(zhuǎn)錄復(fù)合體,啟動(dòng)Ⅰ型干擾素（Type Ⅰ Interferon,IFN-I）的基因轉(zhuǎn)錄,繼而誘導(dǎo)大量IFN-I依賴的抗病毒蛋白,從而起到抗病毒作用。但同時(shí)IFN-I的過量產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致許多自身免疫性疾病及自身炎癥性疾病的發(fā)生,所以IFN-I的表達(dá)及下游信號(hào)的活化必須受到精確調(diào)控。過去十年來的研究已充分證明翻譯后修飾,尤其是泛素化修飾,在激活和調(diào)節(jié)IFN-I信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起關(guān)鍵作用。而去泛素化酶（deubiquitinases,DUB）是與泛素化相關(guān)的一類蛋白酶,它能夠逆轉(zhuǎn)底物蛋白質(zhì)的泛素化修飾,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。在抗病毒天然免疫中相較于E3泛素連接酶介導(dǎo)的泛素化修飾,去泛素化酶的相關(guān)研究仍然較少,很多參與調(diào)控抗病毒免疫的DUB分子還未被發(fā)現(xiàn)。在本課題中我們?cè)噲D找到一些能夠參與調(diào)控抗病毒天然免疫的DUB分子,為感染性疾病的診治提供新的靶點(diǎn)。通過比對(duì)GEO數(shù)據(jù)庫中VSV病毒感染... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．?ＵＳＰ５在ＲＮＡ病毒感染后ｍＲＮＡ表達(dá)水平下調(diào)

為研宄ＲＮＡ病毒感染是否會(huì)下調(diào)ＵＳＰ５的蛋白水平的表達(dá)。我們選擇了?Ａ５４９和??ＩＢＭＭ細(xì)胞作為驗(yàn)證細(xì)胞，來檢測(cè)ＶＳＶ病毒感染時(shí)ＵＳＰ５的蛋白表達(dá)是否受到影響。我們??發(fā)現(xiàn)在感染ＶＳＶ后，Ａ５４９細(xì)胞和ＩＢＭＭ細(xì)胞中的ＵＳＰ５蛋白表達(dá)水平發(fā)生下調(diào)（圖３）。??ＩＢＭＭ?ＶＳＶ?Ａ５４９?ＶＳＶ??０?２?４?６?８?（ｈ）?０?４?８?（ｈ）??ＵＳＰ５?一一一＾—一?ＵＳＰ５???ａ－Ｔｕｂｕｌｉｎ?ａ－Ｔｕｂｕｌｉｎ「響鑛―??圖３．?ＵＳＰ５在ＲＮＡ病毒感染后蛋白表達(dá)水平下調(diào)。Ａ５４９細(xì)胞和ＩＢＭＭ細(xì)胞分別感染ＶＳＶ?（ＭＯＩ??０．１），ＷＢ檢測(cè)ＵＳＰ５的蛋白表達(dá)水平。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＵＳＰ５?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｗｉｔｈ?ＲＮＡ?ｖｉｒｕｓ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．?Ａ５４９?ａｎｄ?ＩＢＭＭ?ｗｅｒｅ??ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＶＳＶ?（ＭＯＩ?０．１），?ａｎｄ?ＷＢ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＵＳＰ５．??本節(jié)中我們分析了?ＶＳＶ和ＺＩＫＡ病毒感染的ＤＵＢ表達(dá)譜，得到了許多和抗病毒免疫??相關(guān)的ＤＵＢ分子。我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)ＤＵＢ分子ＵＳＰ５在病毒感染細(xì)胞中表達(dá)豐度很高，并且??在病毒感染后表達(dá)水平發(fā)生顯著下調(diào)，ＲＴ－ｑＰＣＲ以及Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ驗(yàn)證了在ＲＮＡ病毒ＳｅＶ，??ＶＳＶ和ＷＳＮ感染后的Ａ５４９

表達(dá)了?ＵＳＰ５和對(duì)照質(zhì)粒，然后感染低濃度ＳｅＶ－ｅＧＦＰ和ＶＳＶ－ｅＧＦＰ，利用熒光顯微鏡觀察??并拍攝病毒感染８ｈ后的焚光照片，發(fā)現(xiàn)在ＳｅＶ－ｅＧＦＰ病毒感染時(shí)過表達(dá)ＵＳＰ５的ＨＥＫ２９３Ｔ??細(xì)胞中的熒光信號(hào)強(qiáng)于轉(zhuǎn)染對(duì)照質(zhì)粒的ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞（圖４，?Ａ），在ＶＳＶ－ｅＧＦＰ病毒感??染時(shí)，結(jié)果相同（圖４，?Ａ）。同時(shí)利用流式細(xì)胞儀分析，在３ｘｌ０４個(gè)細(xì)胞中將表達(dá)ｅＧＦＰ細(xì)??胞的作為陽性細(xì)胞，這群陽性細(xì)胞所占總細(xì)胞的百分比為陽性率，比較ＳｅＶ－ｅＧＦＰ和ＶＳＶ－??ｅＧＦＰ?感染時(shí)，轉(zhuǎn)染?ＵＳＰ５?與對(duì)照質(zhì)粒對(duì)陽性率的影響，發(fā)現(xiàn)在?ＳｅＶ－ｅＧＦＰ?感染時(shí)，?ＵＳＰ５?過??表達(dá)的ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞ｅＧＦＰ陽性率高于轉(zhuǎn)染對(duì)照質(zhì)粒的ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞，感染峰向右側(cè)偏??移，在ＶＳＶ－ｅＧＦＰ病毒感染時(shí)，結(jié)果相同（圖４，?Ｂ）。之后在ＨＥＫ２９３Ｔ細(xì)胞上瞬時(shí)高表達(dá)??了?ＵＳＰ５后分別感染ＳｅＶ、ＶＳＶ和ＷＳＮ，?ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測(cè)病毒載量。結(jié)果表明病毒感染后??高表達(dá)ＵＳＰ５的細(xì)胞中病毒的載量明顯高于對(duì)照組（圖４，?Ｃ），證明了過表達(dá)ＵＳＰ５促進(jìn)??病毒的復(fù)制。??Ａ?ＥＶ?ＵＳＰ５?ＥＶ?ＵＳＰ５??ＳｅＶ－ｅＧＦＰ?ＶＳＶ－ｅＧＦＰ??ｑ?物嫌?ｕｎｔｒｅａｔｅｄ????ＥＶ??ＵＳＰ５?—ｖｉｒｕｓ??＞ＧＦＰ?ｓｕｂｓｅｌ?ｅＧＦＰ??一?１１．５?ｒＪ?丨丨?１９．３??ｃ?？？?？？?Ｖ?？＊?？？?ｙ?Ｊ??ｇ?ＳｅＶ－ｅＧＦＰ??ｕ?？？?｜?Ｉ?｜．…’■??ｅＧＦＰ?ｓｕｂｓｅｔ＂?ｅＧＦＰ?ｓｕｂｉｅｉ??

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本文編號(hào)：3370983