促卵泡激素FSH是由垂體前葉嗜堿性細胞合成并分泌的一種糖蛋白類促性腺激素,由α亞基和β亞基通過非共價鍵結合而形成,常用于增進動物的快速繁殖,誘導雌性動物超數(shù)排卵。獸用促卵泡激素FSH多數(shù)是采用從垂體中提取,人用FSH一般是采用尿源性的FSH,即從絕經(jīng)期婦女尿液中提取,但是生產(chǎn)成本依舊較高,且純度無法達到99%。如果進一步提高純度,成本只會更加昂貴。因此本研究使用重組DNA技術對重組綿羊FSH進行分泌表達并對其進行應用研究。首先對重組綿羊促卵泡激素FSH序列進行設計,構建重組表達質(zhì)粒pcDNA3.1-FSHβα。構建好的重組表達質(zhì)粒通過電轉(zhuǎn)染至CHO-K1細胞中,轉(zhuǎn)染后利用G418篩選出單克隆細胞M-FSH-βα-B31A4,單克隆細胞表達重組綿羊FSH的含量達到350 ng/mL。使用5 L生物反應器對單克隆細胞進行培養(yǎng),培養(yǎng)68 h收集細胞上清液。之后采用分子量為10 kD的膜包對細胞上清液超濾濃縮,得到531ng/mL的重組綿羊促卵泡激素FSHβα。重組綿羊促卵泡激素FSHβα制備完成后,采用多次皮下注射雌鼠的方法進行試驗,注射一次后,間隔一天再次進行注射,72 h后對雌鼠進行眼球... 

【文章來源】：西北民族大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

核酸同源性分析

Fig 1 Nucleic acid homology analysis氨基酸密碼子優(yōu)化前后同源性為100%。圖2 氨基酸同源性分析Fig 2 Amino acid homology analysis經(jīng)過密碼子優(yōu)化后，氨基酸與之前序列同源性為100%，則接著進行信號肽分

圖 3 信號肽分析Fig 3 Signal PeptideAnalysis結果顯示，該段氨基酸序列具有信號肽，從 S-score 值大致可以確定，信前 20 位，然后觀察 S-score 較陡峭的位置和有較高位置的 Y-score，確定

【參考文獻】：
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