賈第蟲病是由寄生于人畜腸道的十二指腸賈第蟲（Giardia duodenalis）簡稱賈第蟲引起的原蟲性人畜共患病,該病呈全球性流行,是一種嚴(yán)重危害人類健康的寄生蟲病。賈第蟲具有極高的感染性,能夠?qū)е滤葱员┌l(fā)流行,人感染賈第蟲后臨床表現(xiàn)主要為腹瀉,目前對于賈第蟲病的防治工作越來越深入。賈第素（giardin）是賈第蟲一種獨(dú)有的細(xì)胞骨架成分,目前將賈第素分為4類:α-giardin、β-giardin、δ-giardin和γ-giardin,其中賈第蟲γ-giardin作為賈第蟲特異性蛋白,且具有免疫原性,所以本研究選擇賈第蟲γ-giardin作為抗原建立賈第蟲病診斷方法,旨在將γ-giardin作為賈第蟲病免疫預(yù)防和診斷的重要依據(jù)。本研究中利用制備保存的γ-giardin重組蛋白表達(dá)菌進(jìn)行表達(dá)純化,并對表達(dá)純化的條件進(jìn)行優(yōu)化,用所得的γ-giardin蛋白對BALB/c小鼠進(jìn)行免疫制備多克隆抗體。用γ-giardin蛋白作為包被抗原,建立間接ELISA檢測方法,同時(shí)優(yōu)化ELISA過程條件。用此法對隱孢子蟲、微孢子蟲和毛滴蟲陽性血清檢測進(jìn)行特異性實(shí)驗(yàn),并對50份采集的血清樣品進(jìn)行檢測。... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組蛋白可溶性分析

M：預(yù)染的蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1：γ-賈第素重組蛋tein Marker; 1: The supernatant of recombinant protern γ圖 3-4 重組蛋白的 SDS-PAGE 分析Fig. 3-4 SDS-PAGE analysis of recombinant pro-賈第素蛋白的蛋白定量用 BCA 法進(jìn)行定量測定，檢測結(jié)果，重組蛋間接 ELISA 檢測方法建立度與血清稀釋度的確定當(dāng) γ-賈第素抗原的包被濃度為 200 ng/孔，血清的81，P/N 值最大為 31.284。因此，γ-賈第素抗原 1:25600（表 3-1）。

M：DL2000 DNA Maker；1：第一輪 PCR 產(chǎn)物；2：第二輪產(chǎn)物M：DL2000 DNA Maker；圖 3-5 PCR 引物驗(yàn)證Fig.3-5 PCR primer verification巢式 PCR 反應(yīng)退火溫度優(yōu)化、55.5 ℃、56 ℃、57 ℃、58.2 ℃、60 ℃、63 ℃和 64 ℃R 在退火溫度為 56 ℃時(shí)條帶亮度最為明顯，故第一輪 PC-6）。第二輪 PCR 在退火溫度為 57 ℃時(shí)條帶亮度最為明7 ℃（圖 3-7）。


本文編號：3356782