為進(jìn)一步提高黃牛冷凍精液的體外獲能率以及探究前列腺素在動(dòng)物生殖生理方面的作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)以黃牛冷凍精液、發(fā)情期黃牛的卵巢、黃體為研究對(duì)象。分別選擇了與體外獲能有關(guān)的BO液、percoll液、咖啡因、肝素以及與動(dòng)物生殖密切相關(guān)的前列腺素（PGF2α）受體為研究對(duì)象。采用了不同的獲能方式對(duì)的冷凍精液的體外獲能進(jìn)行了研究；并運(yùn)用分子克隆技術(shù)克隆了黃牛黃體、卵巢PGF2α受體基因的部分序列；免疫組化技術(shù)定位了該受體在黃牛卵巢、黃體的分布情況；生物信息學(xué)方法預(yù)測和分析了該基因及其編碼的蛋白質(zhì)的基本理化性質(zhì)、疏水性、結(jié)構(gòu)域、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)等方面。以期建立起一套冷凍精液體外獲能的最佳條件；并為進(jìn)一步探討前列腺素在動(dòng)物生殖生理方面的作用機(jī)制提供一定的基礎(chǔ)資料。主要的研究結(jié)果如下：1.用BO液、percoll液兩種不同的洗精液處理精子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BO液的效果要優(yōu)于percoll液。2.咖啡因在受精液中的加入時(shí)間為洗滌后的精液在受精液中孵育10～15min后，加入濃度為1%。3.冷凍精液體外獲能的最佳條件為肝素濃度80μg/ml，培養(yǎng)時(shí)間20min；發(fā)生頂體反應(yīng)的最佳條件分別為肝素濃度20μg/ml，培... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

獲能后的精子

圖 1 獲能后的精子 圖 2 發(fā)生頂體反應(yīng)后的精子（200×）Fig1. Sperm capacitation afte（r200X） Fig2. Sperm acrosome reaction afte（r200X）1.3 不同的處理方法對(duì)冷凍精液體外獲能的研究1.3.1 精液的不同處理方法對(duì)體外獲能的影響 洗精液：BO 液受精液：BO 液+20mg/mlBSA+1%雙抗（青霉素 1000IU/ml,鏈霉素 1000IU/ml)+3.38mg/ml 咖啡因（1）BO 上浮法：取預(yù)先平衡在 37℃培養(yǎng)箱中的洗精液 1mL，置于 1.5mL 的尖底離心管中。取出牛凍精 1 支,在 40℃水浴鍋中解凍 5s，將解凍后的精液移入

圖 3.黃體、卵巢 RNA 的提取結(jié)果.1：黃體 RNA；2：卵巢 RNAFig3. RNA extraction of cattle corpus luteum and1:RNA of corpus luteum;2:RNA of ovary基因的 PCR 擴(kuò)增火溫度(54.3℃)擴(kuò)增黃體、卵巢的 PGF2αR 基泳檢測，可見一條介于 500-750bp 之間的 DN大小一致（圖 4）


本文編號(hào)：3356801