為進(jìn)一步提高黃牛冷凍精液的體外獲能率以及探究前列腺素在動物生殖生理方面的作用機(jī)制。本實驗以黃牛冷凍精液、發(fā)情期黃牛的卵巢、黃體為研究對象。分別選擇了與體外獲能有關(guān)的BO液、percoll液、咖啡因、肝素以及與動物生殖密切相關(guān)的前列腺素（PGF2α）受體為研究對象。采用了不同的獲能方式對的冷凍精液的體外獲能進(jìn)行了研究；并運用分子克隆技術(shù)克隆了黃牛黃體、卵巢PGF2α受體基因的部分序列；免疫組化技術(shù)定位了該受體在黃牛卵巢、黃體的分布情況；生物信息學(xué)方法預(yù)測和分析了該基因及其編碼的蛋白質(zhì)的基本理化性質(zhì)、疏水性、結(jié)構(gòu)域、二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)等方面。以期建立起一套冷凍精液體外獲能的最佳條件；并為進(jìn)一步探討前列腺素在動物生殖生理方面的作用機(jī)制提供一定的基礎(chǔ)資料。主要的研究結(jié)果如下：1.用BO液、percoll液兩種不同的洗精液處理精子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BO液的效果要優(yōu)于percoll液。2.咖啡因在受精液中的加入時間為洗滌后的精液在受精液中孵育10～15min后，加入濃度為1%。3.冷凍精液體外獲能的最佳條件為肝素濃度80μg/ml，培養(yǎng)時間20min；發(fā)生頂體反應(yīng)的最佳條件分別為肝素濃度20μg/ml，培... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

獲能后的精子

圖 1 獲能后的精子 圖 2 發(fā)生頂體反應(yīng)后的精子（200×）Fig1. Sperm capacitation afte（r200X） Fig2. Sperm acrosome reaction afte（r200X）1.3 不同的處理方法對冷凍精液體外獲能的研究1.3.1 精液的不同處理方法對體外獲能的影響 洗精液：BO 液受精液：BO 液+20mg/mlBSA+1%雙抗（青霉素 1000IU/ml,鏈霉素 1000IU/ml)+3.38mg/ml 咖啡因（1）BO 上浮法：取預(yù)先平衡在 37℃培養(yǎng)箱中的洗精液 1mL，置于 1.5mL 的尖底離心管中。取出牛凍精 1 支,在 40℃水浴鍋中解凍 5s，將解凍后的精液移入

圖 3.黃體、卵巢 RNA 的提取結(jié)果.1：黃體 RNA；2：卵巢 RNAFig3. RNA extraction of cattle corpus luteum and1:RNA of corpus luteum;2:RNA of ovary基因的 PCR 擴(kuò)增火溫度(54.3℃)擴(kuò)增黃體、卵巢的 PGF2αR 基泳檢測，可見一條介于 500-750bp 之間的 DN大小一致（圖 4）


本文編號：3356801