鴨瘟（Duck plague, DP）是由鴨瘟病毒（Duck plague virus, DPV）（皰疹病毒中的一員）引起鴨、鵝和其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。本研究對(duì)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)禽病防治中心注冊(cè)的DPV-CHv株核糖核苷酸還原酶小亞基（the small subunit of ribonucleotide reductase, R2）基因（GenBank登錄號(hào)：EU071039）進(jìn)行了生物信息學(xué)分析、重組蛋白表達(dá)及多克隆抗體制備和轉(zhuǎn)錄及表達(dá)時(shí)相分析,結(jié)果如下：1DPV R2基因生物信息學(xué)分析。通過(guò)對(duì)DPV R2基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,結(jié)果表明該基因編碼的蛋白是由355個(gè)氨基酸組成的不穩(wěn)定的偏酸性的水溶性蛋白,相對(duì)分子量約為40.68kDa。還發(fā)現(xiàn)該蛋白含有19個(gè)磷酸化位點(diǎn)和7個(gè)糖基化位點(diǎn),沒(méi)有信號(hào)肽切割位點(diǎn),有跨膜區(qū),且該蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。另外,通過(guò)對(duì)DPV R2蛋白氨基酸序列與其它皰疹病毒R2蛋白氨基酸序列相似性和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系析表明,DPV與Alphaherpesvirinae亞科中Mardivirus屬的皰疹病毒有很高的同源性。2DPV R2重組蛋白表... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：44 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 引言
    第一章 文獻(xiàn)綜述和試驗(yàn)?zāi)康?br>        1 文獻(xiàn)綜述
            1.1 皰疹病毒R2基因及其編碼蛋白
                1.1.1 皰疹病毒R2基因
                1.1.2 皰疹病毒R2蛋白
            1.2 鴨瘟病毒
        2 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>第二部分 試驗(yàn)
    第二章 鴨瘟病毒R2基因生物信息學(xué)分析
        1 材料
        2 方法
        3 結(jié)果
            3.1 DPV R2基因所編碼的氨基酸序列序列相似性比較及進(jìn)化關(guān)系分析
            3.2 DPV R2蛋白的理化性質(zhì)分析
            3.3 DPV R2蛋白的結(jié)構(gòu)功能分析
            3.4 DPV R2蛋白的亞細(xì)胞定位分析
            3.5 DPV R2蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        4 討論
    第三章 鴨瘟病毒R2重組蛋白表達(dá)及多克隆抗體制備
        1 材料
            1.1 毒株、載體、菌株、鴨胚和動(dòng)物
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 引物合成
            2.2 擴(kuò)增鴨瘟病毒R2基因
                2.2.1 鴨瘟病毒DNA提取
                2.2.2 擴(kuò)增鴨瘟病毒R2基因
            2.3 構(gòu)建及鑒定pMD20-T/R2克隆載體
                2.3.1 構(gòu)建pMD20-T/R2克隆載體
                2.3.2 鑒定pMD20-T/R2克隆載體
            2.4 構(gòu)建及鑒定pET32a/R2表達(dá)載體
                2.4.1 構(gòu)建pET32a/R2表達(dá)載體
                2.4.2 鑒定pET32a/R2表達(dá)載體
            2.5 表達(dá)及純化DPV R2重組蛋白
                2.5.1 轉(zhuǎn)化pET32a/R2表達(dá)載體
                2.5.2 表達(dá)重組蛋白DPV R2
                2.5.3 檢測(cè)重組蛋白DPV R2的反應(yīng)原性
                2.5.4 純化重組蛋白DPV R2
            2.6 制備及純化兔抗重組蛋白DPV R2多克隆抗體
                2.6.1 制各兔抗重組蛋白DPV R2多克隆抗體
                2.6.2 純化兔抗重組蛋白DPV R2多克隆抗體
        3 結(jié)果
            3.1 鴨瘟病毒R2基因的擴(kuò)增
            3.2 克隆載體pMD20-T/R2的鑒定
            3.3 表達(dá)載體pET32a/R2的鑒定
            3.4 重組蛋白DPV R2的表達(dá)及純化
            3.5 重組蛋白DPV R2的反應(yīng)原性檢測(cè)
            3.6 兔抗重組蛋白DPV R2多克隆抗體效價(jià)測(cè)定及純化
        4 討論
    第四章 鴨瘟病毒R2基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá)時(shí)相研究
        1 材料
            1.1 毒株、菌株、抗體和鴨胚
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器設(shè)備
        2 方法
            2.1 引物合成
            2.2 鴨瘟病毒R2基因轉(zhuǎn)錄類型研究
                2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及鴨瘟病毒RNA提取
                2.2.2 反轉(zhuǎn)錄制備cDNA
                2.2.3 普通PCR檢測(cè)樣品
            2.3 鴨瘟病毒R2基因轉(zhuǎn)錄時(shí)相研究
                2.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
                2.3.2 鴨瘟病毒R2基因轉(zhuǎn)錄時(shí)相研究
            2.4 鴨瘟病毒R2基因表達(dá)時(shí)相研究
        3 結(jié)果
            3.1 藥物抑制試驗(yàn)鑒定鴨瘟病毒R2基因轉(zhuǎn)錄類型
            3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線制作
            3.3 鴨瘟病毒R2基因轉(zhuǎn)錄時(shí)相分析
            3.4 鴨瘟病毒R2基因表達(dá)時(shí)相分析
        4 討論
第三部分 結(jié)論
第四部分 參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介及攻讀碩士學(xué)位期間論文發(fā)表



本文編號(hào)：3354577