納米銅作為納米科技迅猛發(fā)展的重要成果,越來越廣泛的應用于養(yǎng)殖業(yè)、飼料行業(yè)等畜牧獸醫(yī)相關領域。在畜牧業(yè)中,銅作為一種促生長劑被廣泛的使用,但傳統的銅添加劑吸收利用率低,大量銅隨糞便排出,污染了土壤環(huán)境的同時也造成了極大的浪費。而使用納米銅作為飼料添加劑可顯著提高表觀消化率、提高生產性能和機體免疫力。但伴隨著納米銅高利用率和效能而來的生物安全性問題也逐漸凸顯出來。研究表明,納米銅的主要靶器官是腎臟和肝臟,反復經口染毒可引起腎臟和肝臟的損傷；離體實驗顯示,培養(yǎng)基中添加過量的納米銅可以誘導細胞形態(tài)學的變化和細胞器的損傷,同時納米銅還可以劑量依賴性的誘導細胞的凋亡,并在此過程中伴隨著線粒體膜電位的改變,線粒體膜電位的改變被看成是細胞凋亡線粒體途徑（內源性途徑）的起始事件,但關于納米銅與線粒體途徑凋亡關系的更進一步研究尚未發(fā)現報道。本實驗就以豬的腎上皮細胞作為實驗材料,進行20、40、60、80μg/mL四種不同劑量納米銅的染毒處理,通過對豬腎上皮細胞的形態(tài)學變化、凋亡率、線粒體膜電位的變化以及細胞內Bid、Bax、Caspase-3和細胞色素C的mRNA表達變化情況的觀察,探討了納米銅和細胞凋亡... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文詞匯縮寫表
1 前言
    1.1 納米材料及納米銅概述
    1.2 納米銅在畜牧業(yè)上的應用
        1.2.1 納米銅提高表觀消化率與生產性能
        1.2.2 納米銅的類抗生素作用
        1.2.3 納米銅對免疫系統的影響
        1.2.4 納米銅的肝腎毒性
        1.2.5 納米銅與細胞凋亡
    1.3 細胞的凋亡
        1.3.1 線粒體膜電位與細胞凋亡
        1.3.2 細胞色素C與細胞凋亡
        1.3.3 Caspase家族與細胞凋亡
        1.3.4 Bcl-2家族與細胞凋亡
    1.4 本課題目的意義
2 材料和方法
    2.1 細胞株
    2.2 實驗試劑
    2.3 實驗儀器和設備
    2.4 溶液配制
    2.5 細胞的培養(yǎng)
    2.6 細胞的凍存與復蘇
    2.7 細胞的爬片及HE染色
    2.8 細胞的AO/EB染色
    2.9 Annexin-V FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡
    2.10 JC法檢測線粒體膜電位
    2.11 實時熒光定量PCR檢測
        2.11.1 細胞的分組與處理
        2.11.2 總RNA的提取
        2.11.3 總RNA的純度檢測
        2.11.4 反轉錄
        2.11.5 引物的設計及PCR
        2.11.6 熒光定量PCR
    2.12 實驗數據分析與統計
3 結果與分析
    3.1 PK-15豬腎細胞的培養(yǎng)
    3.2 細胞AO/EB染色
    3.3 流式細胞儀檢測細胞凋亡的比率
    3.4 納米銅對細胞線粒體膜電位的影響
    3.5 RNA質量檢測
    3.6 納米銅對Bax基因表達的影響
    3.7 納米銅對Bid基因表達的影響
    3.8 納米銅對Caspase-3基因表達的影響
    3.9 納米銅對CYCS基因表達的影響
4 討論
    4.1 納米銅誘導細胞凋亡
    4.2 納米銅與線粒體
    4.3 納米銅對線粒體途徑的影響
        4.3.1 納米銅對Bid、Bax基因mRNA表達的影響
        4.3.2 納米銅對細胞色素C mRNA表達的影響
        4.3.3 納米銅對Caspase-3 mRNA基因表達影響
5 小結
參考文獻
致謝



本文編號：3354540