藍(lán)舌病（Bluetongue disease, BT）是由藍(lán)舌病毒（Bluetongue virus, BTV）引起的非接觸性蟲(chóng)媒傳染病。綿羊、山羊、牛等家畜和野生反芻動(dòng)物對(duì)該病毒易感,由于感染的血清型不同其臨床表現(xiàn)也不盡相同,主要臨床癥狀為高熱、舌頭變藍(lán)和口腔粘膜水腫出血等。BTV主要分布在熱帶、亞熱帶和溫帶國(guó)家,與其節(jié)肢動(dòng)物宿主的分布范圍一致,該病毒主要通過(guò)庫(kù)蠓等的叮咬進(jìn)行傳播。BTV屬于呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬,病毒粒子呈二十面體對(duì)稱(chēng),無(wú)囊膜。該病毒的基因組由10個(gè)分節(jié)段的雙鏈RNA組成,編碼7種結(jié)構(gòu)蛋白（VP1～VP7）和5種非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1～NS4和NS3a）。VP2和VP5蛋白構(gòu)成了病毒的外層衣殼,其中VP2是主要型特異性抗原,對(duì)藍(lán)舌病的血清型起決定性作用。本研究根據(jù)Genbank中已登錄的血清3型藍(lán)舌病病毒（BTV3） L2基因的OFR序列（登陸號(hào)：No.AJ585124）設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物,從感染BTV3的BHK-21細(xì)胞沉淀中提取RNA,然后進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增L2基因；將擴(kuò)增后的L2基因分別克隆到原核表達(dá)載體pMal-c4X和真核表達(dá)載體pFastBacHTA上,獲... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BTV3-L2基因RT-PCR擴(kuò)增

長(zhǎng)度 2880bp (圖 2-1)。2.3.2重組質(zhì)粒pMal-vp2的雙酶切鑒定結(jié)果獲得的重組質(zhì)粒pMal-vp2經(jīng)過(guò)EcoR I . Pst 1雙酶切后，獲得兩條條帶，大小分別為6600bp和2900bp,與預(yù)期長(zhǎng)度符合（圖2-2)。重組質(zhì)粒的測(cè)序結(jié)果表明L2基因成功克隆到原核表達(dá)載體pM￡iI-c4X的及oR I、/VI酶切位點(diǎn)之間，并且L2基因序列與標(biāo)準(zhǔn)序列（No. AJ585124)完全一致。Ml 1 M5000 5000

以表達(dá)的pMal-c4X空載體為對(duì)照，HRP標(biāo)記的抗MBP的MAb為-抗對(duì)純化后的重組MBP-VP2進(jìn)行western-blot分析，目的條張大小與預(yù)期相符（圖2-3)，表明融合MBP-VP2蛋白已經(jīng)成功表達(dá)并純化。M 1■圖2-3純化重組原核VP2蛋白的westem-blot分析結(jié)果Fig.2-3 Westem-blot analysis of purifiedrecombinant VP2 expressed in E.coli.M: prestained protein Marker; 1: purifiedrecombinant VP2 protein2.4討論有研究表明，BTV的血沿型與L2基因的變異有密切的關(guān)系，說(shuō)明VP2蛋D是BTV血淸型的決定性抗原，|aj吋也可以誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生。因此，制備針對(duì)BTV3 VP2蛋l(fā)lj的特異性印.克隆抗體可以為BTV3型特異性診斷方法的建立奠定基礎(chǔ)。BTV3L2基因的OFR全長(zhǎng)2880bp，其編碼的￥?2班1'_1包含780個(gè)氨基酸殘基，大小為112Kd。本實(shí)驗(yàn)采WpMAL-c4X原核表達(dá)載體成功地表達(dá)了VP2進(jìn)內(nèi)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]藍(lán)舌病病毒重組VP7蛋白單克隆抗體制備及競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 耿宏偉,秦永麗,李俊平,楊濤,孫恩成,劉霓紅,白安斌,徐青元,王凌鳳,趙晶,覃紹敏,林俊,郭怡璠,吳東來(lái).  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(05)
[2]抗藍(lán)舌病病毒VP6和VP7蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[J]. 魏鵬,孫恩成,劉霓紅,楊濤,徐青元,秦永麗,趙晶,馮瑜菲,王文世,張翠云,吳東來(lái).  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(05)
[3]藍(lán)舌病研究綜述[J]. 翁善鋼.  廣東畜牧獸醫(yī)科技. 2012(01)
[4]抗藍(lán)舌病病毒VP7和NS2蛋白單克隆抗體的制備及鑒定[J]. 秦永麗,孫恩成,耿宏偉,楊濤,劉霓紅,趙晶,王凌鳳,徐青元,蔡緒禹,李文京,吳東來(lái).  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(10)
[5]藍(lán)舌病病毒17型VP2蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定[J]. 王凌鳳,楊濤,孫恩成,耿宏偉,秦永麗,趙晶,蔡緒禹,劉霓紅,李文京,吳東來(lái).  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(06)
[6]呼腸孤病毒科的系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 高芳鑾,范國(guó)成,謝荔巖,黃美英,吳祖建.  激光生物學(xué)報(bào). 2008(04)
[7]環(huán)狀病毒病研究進(jìn)展[J]. 潘亮.  福建畜牧獸醫(yī). 2007(S1)
[8]藍(lán)舌病的研究進(jìn)展[J]. 劉景利,孫建宏,管雪婷,曾祥偉.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2005(09)
[9]藍(lán)舌病及其防制研究進(jìn)展[J]. 孫好學(xué),白建,龐全海.  畜禽業(yè). 2005(03)
[10]動(dòng)物藍(lán)舌病毒L2基因克隆及序列分析比較[J]. 張以芳,朱建波,劉建平,向文彬,信愛(ài)國(guó),張念祖,殷震.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2002(06)

碩士論文
[1]藍(lán)舌病病毒8型VP2蛋白單克隆抗體制備及其抗原表位鑒定[D]. 秦永麗.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[2]藍(lán)舌病病毒17型VP2蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定[D]. 王凌鳳.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2011
[3]藍(lán)舌病病毒VP7蛋白的原核表達(dá)及單克隆抗體的制備[D]. 宋紅梅.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3349309