發(fā)布時間：2021-08-18 06:34

　　2015年7月以來,心包積液-包涵體肝炎綜合征（HPS）在我國大部分家禽密集養(yǎng)殖地區(qū)大規(guī)模爆發(fā)流行并迅速蔓延,給我國家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。針對新發(fā)疫情,本研究從HPS蛋雞肝臟組織中分離1株高致病性HLJFAd15毒株并鑒定其為FAdV-4。HLJFAd15全基因組分析發(fā)現(xiàn)HLJFAd15存在ORF19、ORF27的大片段天然缺失,與我國近期分離鑒定的高致病性毒株一致,被定義為新基因型FAdV-4。我們利用HLJFAd15毒株成功建立了新發(fā)FAdV-4的SPF雞攻毒感染模型,其口服接種和肌肉注射接種的致死率分別達到76.9%和100%,同時能夠很好的復(fù)制臨床心包積液和包涵體肝炎的癥狀。SPF雞動物感染模型的成功建立對我國新發(fā)FAdV-4疫苗的研發(fā)和致病機制研究具有重要意義。鑒于目前為止尚沒有鴨源FAdV-4的全基因組序列,我們分離鑒定了 1株鴨源FAdV-4毒株HLJDAd15,并對該毒株進行了全基因組序列測定,上傳GenBank第1株鴨源FAdV-4的全基因組序列,豐富了 FAdV-4基因組的多樣性,為FAdV-4診斷靶標的選擇提供了參考。HLJDAd15致病性實驗顯示我國新... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１肝臟ＤＮＡ進行ＰＣＲ擴增結(jié)果??

中國農(nóng)業(yè)科學院博士后出站報告?第二章新發(fā)血清４型禽腺病毒遺傳進化分析??Ｍ?１?＋?－??２．〇〇〇＾?ＭＨａ??ｉ，〇，?ｇ—??＾ＰＴ?４＾５６１?ｂｏ??５〇〇＾?ＷｍｍＳｍ?Ｆ??２５〇＾?ｉｍｍｉ??ｉ」??圖２－１肝臟ＤＮＡ進行ＰＣＲ擴增結(jié)果??Ｍ：?ＤＬ２，０００；?１：?ＨＬＪＦＡｄｌ５；?＋：陽性對照；陰性對照??Ｆｉｇ．?２－１?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＤＮＡ?ｓａｍｐｌｅ?ｏｆ?ｌｉｖｅｒ??Ｍ：?ＤＬ２，０００；?１：?ＨＬＪＦＡｄｌ５；?＋：?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??２．３．１．２ＨＬＪＦＡｄｌ５?的?ｈｅｘｏｎ?序歹丨Ｊ分析??ＨＬＪＦＡｄｌ５毒株鑒定為ＦＡｄＶ－４之后，設(shè)計針對ＦＡｄＶ－４的ｈｅｘｏｎ序列的特??異性引物，擴增其全長ｈｅｘｏｎ序列并進行序列分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ＨＬＪＦＡｄｌ５毒株與??我國流行ＪＳＪ１３毒株高度同源（圖２－２）。??１ＱＯｒ?７６４?（ＪＮ１１２３７３｝?ＦＡｄｖ＾??一ｔ?ＨＧ?（ＧＵ７３４１０４）??－１００Ｊ?Ａ－２Ａ（ＡＦ０８３９７５）?ｆＡｄｖ＾??Ｌ??ＨＢＱ１２?（ＫＭ０９６５４５）??４３??３４０?（ＮＣ?０２１２２１｝?ＦＡｄｖ－Ｂ??．！〇ｎ??ＣＥＬＯ?（Ｕ４６９３３）?ｆａ＜ｊｖ－ａ??９Ｔ?？?ＨＬＪＦＡｄ１５??ｃｌ?ＪＳＪ１３（ＫＭ０９８５４４）??１〇〇?ＫＣ（ＥＵ１７７５４５）??—?ＰＢ－０５（ＥＵ９３１６９１）?ＦＡｄｖ＾??１００?１００?ＰＫ－０１?（ＥＵ９３１６９３）??９７????ＫＲ５?（ＨＥ６Ｃ？１５２）

．３?ＨＬＪＦＡｄｌ５?的?ｈｅｘｏｎ?序歹ＩＪ分析??通過ｈｅｘｏｎ全長序列比對，確定ＨＵＦＡｄｌ５毒株為ＦＡｄＶ－４，鑒于ＨＬＪＦＡｄｌ５??毒株與ＪＳＪ１３毒株高度同源，我們根據(jù)ＪＳＪ１３毒株的序列（ＧｅｎＢａｎｋ序列號：??ＫＭ０９６５４４）設(shè)計了?３６對引物，擴增了?ＨＵＦＡｄｌ５毒株的全基因組序列，并上傳??至ＧｅｎＢａｎｋ?（序列號：ＫＵ９９１７９７）。通過全基因組序列分析發(fā)現(xiàn)，ＨＬＪＦＡｄｌ５毒??株的基因組在ＯＲＦ４２和ＯＲＦ４３之間存在１９６６ｂｐ的大片段天然缺失（圖２－３），??證實為我國新發(fā)的ＦＡｄＶ－４毒株。??２９４６４?３５４１３｝???３７３７８ｐ＾§：?４０１１５??一—???、．：丨丨丨．：＾：?Ｉ??????丨．．?：．．：：．；??（ＨＥ６０８１５２）?處?ＯＲｆ２２?０？?２７?ＯＲＦ２８??．?酬Ａ??畛??ＯＮＩ?０Ｗ＜２?ＯＲＴ２９??（ＧＵ１８８４２８）???ＪＳＪ１３??（ＫＭ０９６５４４）?１?＿??—???■■??ＨＢ１５１０??（ＫＵ５８７５１９）???一一?—??２９４８２?３５４２７?３５４２８?３８１６４???＂＂??????Ｉ�。�?—?—?ｆ８８０８８？＊???ｉｎ?．ＪＪＵＵＵ??ＨＬＪＦＡｄｌ５?靈麵??（ＫＵ９９１７９７）?參?ｏｗｗ?ｃ？ｍ??ｕ?納峰??Ｘ?Ｌ?｜?Ｇ叫?Ｉ?｜???０?２０００?４０００?６０００?８０００?１００００??圖２－３?ＨＵＦＡｄｌ?５的１９６６?ｂｐ缺失序列分析??Ｆｉｇ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Ⅰ亞群禽腺病毒通用PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 肖躍強,于雪,劉吉山,楊慧,苗立中,徐晴晴,何誠,沈志強.  中國預(yù)防獸醫(yī)學報. 2018(03)
[2]雞馬立克氏病強弱病毒株P(guān)CR鑒別檢測方法在診斷中的應(yīng)用評價[J]. 呂紅超,張艷萍,孫國榮,高玉龍,李志杰,鄭惠文,包珂巖,王笑梅,劉長軍.  中國預(yù)防獸醫(yī)學報. 2016(07)
[3]Ⅰ群禽腺病毒SYBR GreenⅠ熒光PCR檢測方法的建立[J]. 文艷玲,謝芝勛,王瑩,謝麗基.  中國獸醫(yī)科學. 2008(09)
[4]禽腺病毒江蘇分離株的細胞培養(yǎng)特性[J]. 周斌,鄭其升,劉華雷,曹瑞兵,陳溥言.  南京農(nóng)業(yè)大學學報. 2005(02)

碩士論文
[1]禽腺病毒血清4型巢式PCR和環(huán)介導(dǎo)等溫擴增檢測方法建立及應(yīng)用[D]. 鐘鳴.東北農(nóng)業(yè)大學 2019



本文編號：3349388