發(fā)布時(shí)間：2021-08-15 05:08

　　豬附紅細(xì)胞體（Eperythrozoon suis）可以引起豬附紅細(xì)胞體病,它主要存在于豬的紅細(xì)胞表面、血漿以及骨髓內(nèi),引起主要癥狀有黃疸、發(fā)熱和貧血。對(duì)于豬附紅細(xì)胞體病暫時(shí)沒有較好的手段控制,而且已知的功能性基因偏少。因此,本試驗(yàn)根據(jù)NCBI中公布的豬附紅細(xì)胞體基因組序列,PCR擴(kuò)增獲得包括全基因在內(nèi)1561bp的吉林株膜蛋白OxaA基因序列,并上傳NCBI（登錄號(hào)：YP₀04249851.1）。獲得的OxaA基因序列與豬附紅細(xì)胞體基因組KI₃806（登錄號(hào)：NC₀15153）比較,存在21處同義突變,核苷酸序列同源性為98%,氨基酸序列同源性為100%。利用ExPASy、CPHmodels數(shù)據(jù)庫及TMHMM等方法對(duì)OxaA蛋白的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示,OxaA蛋白的理論等電點(diǎn)為9.98,偏堿性；存在多個(gè)信號(hào)肽可能位點(diǎn)和5個(gè)跨膜區(qū)域；二級(jí)結(jié)構(gòu)以α螺旋、不規(guī)則卷曲為主；三級(jí)結(jié)構(gòu)有明顯的折疊層次； B細(xì)胞抗原表位可能存在于20～24位、28～40位、45～53位、142～150位、260～263位氨基酸處；在9... 

【文章來源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
前言
    1. 研究概況
    2 豬附紅細(xì)胞體病的發(fā)病和流行特點(diǎn)及其防治方法
    3 豬附紅細(xì)胞體病診斷方法的研究進(jìn)展
        3.1 形態(tài)學(xué)觀察
        3.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
        3.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
        3.4 單克隆抗體技術(shù)
        3.5 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
    4 豬附紅細(xì)胞體基因及蛋白研究進(jìn)展
    5 本研究的目的及意義
材料與方法
    1 材料
        1.1 試驗(yàn)樣本
        1.2 常用載體和感受態(tài)菌
        1.3 實(shí)驗(yàn)所需酶和試劑
        1.4 主要儀器設(shè)備
        1.5 試驗(yàn)所用部分試劑
    2 方法
        2.1 引物的設(shè)計(jì)
        2.2 血液基因組DNA的提取
        2.3 OxaA蛋白生物信息學(xué)
        2.4 吉林株OxaA基因的PCR擴(kuò)增
        2.5 吉林株OxaA基因的純化回收
        2.6 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.7 豬附紅細(xì)胞體OxaA基因的克隆與鑒定
        2.8 OxaA基因膜外區(qū)片段的PCR擴(kuò)增
        2.9 膜外區(qū)片段A和B的純化與回收
        2.10 豬附紅細(xì)胞體OxaA基因膜外區(qū)片段的克隆與鑒定
        2.11 豬附紅細(xì)胞體OxaA基因膜外區(qū)片段的亞克隆與鑒定
        2.12 表達(dá)菌株的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.13 誘導(dǎo)產(chǎn)物的SDS聚丙烯酰胺電泳
        2.14 表達(dá)產(chǎn)物的Western blotting分析
        2.15 重組蛋白的純化
        2.16 建立重組蛋白的間接ELISA方法
結(jié)果
    1 吉林株OxaA基因的PCR擴(kuò)增
    2. 豬附紅細(xì)胞體OxaA基因的克隆與鑒定
    3 吉林株豬附紅細(xì)胞體OxaA基因的生物信息分析
    4 OxaA基因膜外區(qū)片段的PCR擴(kuò)增
    5 膜外區(qū)片段重組克隆質(zhì)粒的PCR及酶切鑒定
    6 膜外區(qū)片段膜外區(qū)片段重組表達(dá)質(zhì)粒的PCR及酶切鑒定
    7 表達(dá)菌株的誘導(dǎo)表達(dá)
    8 表達(dá)產(chǎn)物的免疫印跡分析
    9 重組A蛋白與重組B蛋白的可溶性分析
    10 重組A蛋白與重組B蛋白的純化
    11 間接ELISA檢測方法的建立
        11.1 純化抗原最佳包被濃度的篩選與血清最佳稀釋度的篩選
        11.2 最適封閉液的篩選和最佳封閉時(shí)間的篩選
        11.3 血清最佳作用時(shí)間的篩選
        11.4 酶標(biāo)二抗最佳作用時(shí)間和最佳稀釋度的篩選
        11.5 底物最適顯色時(shí)間的篩選
        11.6 陽性和陰性臨界值的確定
        11.7 特異性試驗(yàn)結(jié)果
        11.8 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        11.9 臨床樣本檢測結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬附紅細(xì)胞體SRP54基因的克隆及表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建[J]. 邢瑩,賈立軍,張守發(fā).  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(12)
[2]豬附紅細(xì)胞體50S核糖體基因PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 劉明明,賈立軍,薛書江,梁晚?xiàng)?張守發(fā).  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(12)
[3]豬附紅細(xì)胞體培養(yǎng)方法及藥敏試驗(yàn)研究[J]. 姜富成,劉聚祥,王克寧,李輝,劉靜,王建平.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(07)
[4]新基因功能的研究策略[J]. 字友梅,王少元.  醫(yī)學(xué)綜述. 2011(10)
[5]豬附紅細(xì)胞體單管巢式PCR診斷方法的建立及應(yīng)用[J]. 鄭秀紅,賈立軍,邢瑩,張守發(fā).  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(02)
[6]附紅細(xì)胞體研究進(jìn)展[J]. 盧新榮,張守峰,鐘發(fā)剛.  新疆農(nóng)墾科技. 2011(01)
[7]豬附紅細(xì)胞體巢式PCR診斷方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 鄭秀紅,邢瑩,賈立軍,薛書江,甄立家,張守發(fā).  中國畜牧獸醫(yī). 2011(01)
[8]豬附紅細(xì)胞體病原特征及其致病性分析[J]. 王廣秀,徐鑌蕊,李偉,杜艷.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(09)
[9]豬附紅細(xì)胞體病診斷與防控[J]. 拜廷陽,趙德明,吳志明,閆若潛,普志平.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2010(08)
[10]用特殊染色法對(duì)豬附紅細(xì)胞體病的診斷研究[J]. 黃小東,潘耀謙,方滿新.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2010(05)

博士論文
[1]曲霉CJ22-326產(chǎn)殼聚糖酶基因的克隆、表達(dá)與定點(diǎn)突變[D]. 李松林.江南大學(xué) 2009
[2]具有潛在疫苗價(jià)值的弓形蟲新基因wx2，wx的篩選與鑒定[D]. 吳翔.中南大學(xué) 2007

碩士論文
[1]林蛙嗜水氣單胞菌氣溶素基因原核表達(dá)及免疫原性的初步分析[D]. 白雪梅.延邊大學(xué) 2011
[2]豬附紅細(xì)胞體亞單位疫苗的初步研究[D]. 呂舟.延邊大學(xué) 2009
[3]禽呼腸孤病毒非結(jié)構(gòu)蛋白的克隆表達(dá)及重組蛋白ELISA方法的建立[D]. 秦春香.廣西大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3343915