細胞培養(yǎng)技術(shù)是細胞生物學研究、醫(yī)學、病毒分離培養(yǎng)與疫苗研發(fā)等研究領域不可欠缺的常用工具。細胞系具有一定的體外增殖能力,主要包括自發(fā)永生化細胞系和癌基因轉(zhuǎn)化細胞系,前者為正常細胞,但自然發(fā)生幾率很低；后者的建立相對容易,但細胞的核型、表型、分化等具有不同程度的改變,而且因含癌基因、抗性基因、病毒序列等安全隱患。因此,建立不含癌基因、抗性基因和病毒序列的永生化細胞系具有很好的應用價值。端粒（telomere）是真核細胞染色體末端的特殊結(jié)構(gòu),與細胞分裂和衰老密切相關。端粒酶負責端粒的復制,由端粒RNA、端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶（telomerase reverse transcriptase, TERT）與端粒酶相關蛋白組成。研究實驗資料顯示,導入外源TERT基因不僅可使原代細胞永生化,而且建立的永生化細胞系為正常細胞�；�?qū)敕椒ㄖ饕兄亟M載體轉(zhuǎn)染法和病毒載體轉(zhuǎn)化法,前者基因轉(zhuǎn)染效率較低,通常需用抗性篩選來獲得穩(wěn)定的細胞克隆；后者轉(zhuǎn)導效率較高,但存在病毒序列等安全隱患。轉(zhuǎn)座子（transposon）是細胞基因組內(nèi)可移動序列,不僅可作為基因轉(zhuǎn)移載體,而且基因轉(zhuǎn)移效率較高,不需通過抗性篩選即可獲得穩(wěn)定表... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

PCR擴增產(chǎn)物的電泳分析

分別用轉(zhuǎn)座子報告載體pTEG-GFP和pEGFP-N 1轉(zhuǎn)染PK-15細胞，轉(zhuǎn)染后24h在突光顯微鏡下觀察，從圖1-3中可以看到，兩個載體轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)中中的GFP陽性細胞數(shù)達到70%,不僅說明載體構(gòu)建正確，還說明豬EF-la啟動子的轉(zhuǎn)錄活性與pEGFP-Nl中CMV強啟動子相當。

圖1-4 SB轉(zhuǎn)座子單獨或SB轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)介導的報告基因在GO與G7期整合效率檢測 1-4 Detection of SB transposon-mediated reporter gene integration into porcine cells座子載體的構(gòu)建與鑒定豬TERTcDNA擴增與測序鑒定T-PCR擴增的豬TERT cDNA為預期的3399bp (圖1-5)。測序結(jié)果顯示，的 TERTcDNA 與發(fā)表序列（GenBankaccession no:NM-001244300)相比，8、582堿基由0變?yōu)榘?2169-2172堿基由丁0(3丁變?yōu)?0^,其中2個核差異只引起1個氨基酸改變，無插入和缺失突變。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3336879