發(fā)布時(shí)間：2017-04-28 18:16

  本文關(guān)鍵詞：雞馬立克病發(fā)病與meq、pp38、PRNP、SPRN、akt基因表達(dá)量之間的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】為探明meq、pp38、PRNP、SPRN、akt在MD雞體內(nèi)的表達(dá)規(guī)律以及與雞馬立克病發(fā)病之間的關(guān)系,本研究擬用MDV-MD5毒株復(fù)制雞MD腫瘤病例,通過(guò)Real-time PCR對(duì)meq、pp38、PRNP、SPRN和akt基因m RNA水平的相對(duì)轉(zhuǎn)錄量進(jìn)行檢測(cè),分析攻毒雞各組織中的表達(dá)變化規(guī)律,探討上述基因表達(dá)量與MDV感染以及與MD腫瘤形成、發(fā)生、發(fā)展之間的相關(guān)性,為進(jìn)一步研究它們?cè)谀[瘤發(fā)病學(xué)中的作用提供理論依據(jù)。【方法】(1)通過(guò)瓊脂擴(kuò)散、分子生物學(xué)以及蝕斑試驗(yàn)對(duì)MDV-MD5毒株進(jìn)行鑒定,以人工攻毒建立雞MD腫瘤病例,從攻毒60d開(kāi)始,每隔30d剖檢感染陽(yáng)性雞和對(duì)照雞,150d全部撲殺,記錄感染率、死亡率和致瘤率。(2)通過(guò)病理組織學(xué)觀察,將150d的感染雞分成腫瘤病變雞、無(wú)腫瘤病變雞和陰性對(duì)照雞。(3)每個(gè)實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)選取3只,無(wú)菌采集14個(gè)組織樣品,提取各樣品總RNA并反轉(zhuǎn)錄,以c DNA為模板進(jìn)行meq、pp38、PRNP、SPRN、akt和β-actin的Real-time PCR,分析3個(gè)實(shí)驗(yàn)組雞14個(gè)不同組織樣品間各基因在m RNA水平的相對(duì)轉(zhuǎn)錄差異。【結(jié)果】(1)經(jīng)瓊脂擴(kuò)散、RT-PCR擴(kuò)增meq和pp38以及蝕斑試驗(yàn)鑒定MD5毒株為陽(yáng)性,TCID50=10-5.6363/0.1m L,以MD5株復(fù)制內(nèi)臟型MD腫瘤病例。30d后經(jīng)RT-PCR檢測(cè),感染率為85.42%,攻毒60d后出現(xiàn)死亡,90d剖檢肉眼最早發(fā)現(xiàn)腫瘤,腫瘤發(fā)生率為17.07%,死亡率為24.39%,腫瘤多見(jiàn)于肝臟、脾臟和腎臟。(2)MD有腫瘤病變雞的多個(gè)內(nèi)臟有腫瘤病變,表面和切面有大小不等、質(zhì)地堅(jiān)硬的灰白色結(jié)節(jié),鏡下正常組織結(jié)構(gòu)被破壞,有大量的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。MD無(wú)腫瘤病變雞和陰性對(duì)照雞未見(jiàn)明顯的病理組織學(xué)變化。(3)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組中14個(gè)組織樣品meq、pp38、PRNP、SPRN和akt的m RNA轉(zhuǎn)錄水平,meq僅在MDV攻毒雞中表達(dá),陰性對(duì)照雞中不表達(dá)。除心臟和卵巢外,其余12個(gè)腫瘤病變組織meq的表達(dá)量均高于無(wú)病變組織;腫瘤病變雞眼瞼、卵巢和胰腺pp38表達(dá)量與無(wú)病變雞相比差異不顯著(P0.05),其余11個(gè)腫瘤病變組織pp38的表達(dá)量均高于無(wú)腫瘤病變雞;除肌胃和腸外,其余12個(gè)腫瘤病變組織PRNP的表達(dá)量均高于無(wú)病變雞和對(duì)照雞,脾臟和腎臟的表達(dá)差異最高。無(wú)腫瘤病變雞14個(gè)組織相對(duì)于對(duì)照雞表達(dá)差異不顯著(P0.05);SPRN在肌胃中不表達(dá),腺胃、腸和眼瞼中微量表達(dá)。除皮膚和坐骨神經(jīng),腫瘤病變雞其余8個(gè)組織SPRN的表達(dá)量均高于對(duì)照雞。無(wú)腫瘤病變雞14個(gè)組織SPRN的表達(dá)量與對(duì)照雞相比差異不顯著(P0.05);腫瘤病變雞肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦和皮膚相比于對(duì)照雞akt表達(dá)量差異顯著(P0.05),其余8個(gè)腫瘤病變組織與對(duì)照雞相比差異不顯著(P0.05)。無(wú)腫瘤病變雞14個(gè)組織akt的表達(dá)量與對(duì)照雞相比差異不顯著(P0.05)。MD腫瘤組織肝臟、脾臟、肺臟、腎臟和皮膚中,meq、pp38、PRNP、akt同時(shí)過(guò)表達(dá),而除肺臟外,SPRN的表達(dá)量無(wú)明顯變化。【結(jié)論】(1)本試驗(yàn)成功復(fù)制出雞MD腫瘤病例。(2)Real-time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),MDV標(biāo)志性基因meq和pp38在MD腫瘤病變雞中顯著表達(dá),meq表達(dá)量與腫瘤的形成相關(guān),pp38表達(dá)量與腫瘤的形成不相關(guān)。(3)PRNP表達(dá)量與MDV感染相關(guān)聯(lián),PRNP在MDV攻毒雞組織中過(guò)表達(dá)。PRNP的差異表達(dá)與腫瘤組織病變程度呈正相關(guān),腫瘤組織病變?cè)絿?yán)重,PRNP表達(dá)量的上調(diào)幅度越大;(4)SPRN在雞組織中的表達(dá)量與MDV感染以及MD腫瘤的形成均不相關(guān),且與PRNP的表達(dá)量也不相關(guān);(5)MDV感染不引起akt表達(dá)量上調(diào),akt在MD腫瘤組織中過(guò)表達(dá)。(6)meq、pp38、PRNP、akt在MD腫瘤組織中同時(shí)過(guò)表達(dá),而SPRN的表達(dá)量無(wú)明顯變化。
【關(guān)鍵詞】：雞馬立克病 meq pp38 PRNP SPRN akt
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31
【目錄】：

• 摘要3-4
• Summary4-8
• 縮略詞中英文對(duì)照表8-9
• 第一章 緒論9-20
• 1.1 雞馬立克病的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展9-16
• 1.1.1 病原學(xué)9-12
• 1.1.2 流行病學(xué)特性12
• 1.1.3 臨床癥狀和病理變化12-13
• 1.1.4 發(fā)病機(jī)制13-15
• 1.1.5 致瘤相關(guān)基因15-16
• 1.2 PRNP基因16-17
• 1.3 SPRN基因17
• 1.4 akt基因17-18
• 1.5 研究目的和意義18-19
• 1.6 研究?jī)?nèi)容和方法19-20
• 1.6.1 MD腫瘤病例的復(fù)制19
• 1.6.2 馬立克病雞組織中meq、pp38、PRNP、SPRN、akt基因表達(dá)量的測(cè)定19-20
• 第二章 雞馬立克病腫瘤病例的復(fù)制20-27
• 2.1 材料與方法20-23
• 2.1.1 藥品和試劑20
• 2.1.2 主要儀器20
• 2.1.3 毒株、雞胚和動(dòng)物20
• 2.1.4 CEF的制備20-21
• 2.1.5 病毒的增殖21
• 2.1.6 MDV的鑒定21-22
• 2.1.7 MDV細(xì)胞半數(shù)感染量（TCID50）的測(cè)定22
• 2.1.8 MDV的蝕斑試驗(yàn)22
• 2.1.9 MDV人工攻毒22
• 2.1.10 MD5毒株攻毒的感染率、死亡率和致瘤率22-23
• 2.2 結(jié)果與分析23-26
• 2.2.1 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)23
• 2.2.2 總RNA的提取23
• 2.2.3 MDV的meq、pp38基因RT-PCR擴(kuò)增檢測(cè)23-24
• 2.2.4 MD5的蝕斑試驗(yàn)24-25
• 2.2.5 MDV的TCID50的測(cè)定25
• 2.2.6 MD5毒株攻毒雞的感染率、死亡率和致瘤率25
• 2.2.7 MD5攻毒腫瘤雞的各內(nèi)臟發(fā)生腫瘤情況25-26
• 2.3 討論26-27
• 第三章 馬立克病雞組織中meq、pp38、PRNP、SPRN、akt的表達(dá)量測(cè)定27-41
• 3.1 材料與方法28-29
• 3.1.1 病料來(lái)源28
• 3.1.2 主要試劑28
• 3.1.3 病理組織學(xué)觀察28
• 3.1.4 引物設(shè)計(jì)與合成28
• 3.1.5 各組織樣品總RNA的提取28
• 3.1.6 cDNA的合成28-29
• 3.1.7 組織樣品meq、pp38、PRNP、SPRN、akt的mRNA表達(dá)量測(cè)定29
• 3.1.8 數(shù)據(jù)處理29
• 3.2 結(jié)果29-39
• 3.2.1 病理組織學(xué)觀察29-32
• 3.2.2 各組織樣品總RNA的提取結(jié)果32
• 3.2.3 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果32-33
• 3.2.4 熒光定量引物的特異性檢測(cè)33
• 3.2.5 各組織樣品中meq的mRNA表達(dá)量測(cè)定33-34
• 3.2.6 各組織樣品中pp38的mRNA表達(dá)量測(cè)定34
• 3.2.7 各組織樣品中PRNP的mRNA表達(dá)量測(cè)定34-37
• 3.2.8 各組織樣品中SPRN的mRNA表達(dá)量測(cè)定37
• 3.2.9 各組織樣品中akt的mRNA表達(dá)量測(cè)定37-38
• 3.2.10 腫瘤組織中meq、pp38、PRNP、SPRN和akt的表達(dá)差異38-39
• 3.3 討論39-41
• 結(jié)論41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻(xiàn)43-51
• 作者簡(jiǎn)介51-52
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介52-53

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  本文關(guān)鍵詞：雞馬立克病發(fā)病與meq、pp38、PRNP、SPRN、akt基因表達(dá)量之間的相關(guān)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：333330