本文關(guān)鍵詞：玉屏風(fēng)多糖合生元對(duì)獺兔免疫功能和腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究通過體內(nèi)外試驗(yàn),旨在探討未發(fā)酵玉屏風(fēng)多糖(UYP)和少孢根霉菌SH發(fā)酵的玉屏風(fēng)多糖合生元(FYP)的單糖構(gòu)成、免疫活性及其對(duì)獺兔腸道菌群和屏障的影響。將不同濃度的UYP或FYP同正�；蚪�(jīng)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠免疫細(xì)胞孵育,探究其體外免疫活性；選取45只斷奶獺兔,預(yù)飼一周后隨機(jī)分為對(duì)照組(NC)、UYP組和FYP組,分別飼喂含1%o生理鹽水、UYP和FYP的基礎(chǔ)日糧,持續(xù)28 d,探究體內(nèi)免疫活性和對(duì)獺兔腸道菌群及屏障的影響。結(jié)果如下：1. GC-MS測(cè)得UYP和FYP的單糖主要是果糖和吡喃葡萄糖苷,FYP中毗喃葡萄糖苷較UYP顯著提高(P0.01)。2.MTT試驗(yàn)表明,UYP、FYP和LPS均顯著促進(jìn)小鼠免疫細(xì)胞增殖(P0.01),但前兩者的活性均顯著低于LPS(P0.01)：FYP對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的影響顯著強(qiáng)于UYP(P0.01),部分濃度的FYP對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響也顯著強(qiáng)于UYP(P0.05或P0.01);此外,UYP和FYP均顯著降低經(jīng)LPS誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞的增殖活性(P0.01),分別在3.200 mg/mL和0.200 mg/mL時(shí)脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性與正常細(xì)胞差異不顯著(P0.05),且均在0.800 mg/mL時(shí)胸腺淋巴細(xì)胞增殖活性與正常細(xì)胞差異不顯著(P0.05),但FYP處理后更接近正常胸腺淋巴細(xì)胞增殖活性。3.中性紅試驗(yàn)表明,UYP和FYP均顯著提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力和合成NO能力(P0.01)。FYP較UYP顯著增強(qiáng)其吞噬活性(P0.01),在0.050 mg/mL及以上濃度時(shí)顯著促進(jìn)其釋放NO(P0.01),但均顯著低于LPS的作用(P0.01)。4.rtPCR分析UYP和FYP體外對(duì)小鼠免疫細(xì)胞基因表達(dá)的影響,結(jié)果表明,LPS顯著上調(diào)炎性細(xì)胞因子、TLR4、NF-κB和iNOS的表達(dá)(P0.01),UYP顯著上調(diào)脾淋巴細(xì)胞TLR4和NF-κB的表達(dá)(P0.05),FYP顯著上調(diào)巨噬細(xì)胞iNOS、脾淋巴細(xì)胞TLR4(P0.01)和淋巴細(xì)胞NF-r,B的表達(dá)(P0.05),且FYP活性高于UYP,但顯著低于LPS(P0.01)。此外,UYP和FYP顯著抑制經(jīng)LPS誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子、TLR4、NF-κB (P0.01)和iNOS (P0.05)的表達(dá)；FYP較UYP顯著降低巨噬細(xì)胞TLR4、NF-κB和胸腺淋巴細(xì)胞TLR4的表達(dá)(P0.01)。5.獺兔體內(nèi)試驗(yàn)表明,UYP(P0.05)和FYP(P0.01)均顯著提高獺兔平均日增重,FYP的活性顯著高于UYP(P0.01)；且兩者均顯著提高其脾臟指數(shù)(P0.01),FYP的活性顯著高于UYP(P0.05)。6.rtPCR分析表明,UYP和FYP均能促進(jìn)獺兔脾臟中細(xì)胞因子的表達(dá),FYP更有效的上調(diào)IL-2、TNF-α和IL-10的mRNA水平(P0.05)。ELISA檢測(cè)表明,UYP和FYP均提高獺兔血清中IL-2、IL-4、IL-12、TNF-α和IFN-γ的蛋白濃度,FYP較UYP更有效的上調(diào)血清中細(xì)胞因子的蛋白濃度,其中IL-2、IL-6、TNF-α和IL-10顯著提高(P0.05或P0.01)。7. rtPCR分析表明,UYP顯著上調(diào)獺兔空腸(P0.05)、回腸和脾臟(P0.01)中TLR2及回腸、盲腸和脾臟(P0.01)中TLR4的表達(dá),FYP顯著促進(jìn)空腸、回腸和脾臟中TLR2及空腸、回腸、盲腸和脾臟中TLR4的表達(dá)(P0.01)；FYP較UYP顯著增加空腸(P0.05)和回腸(P0.01)中TLR2及空腸(P0.05)和脾臟(P0.01)中TLR4的表達(dá)。8. PCR-DGGE分析獺兔腸道菌群結(jié)構(gòu)表明,空腸和回腸中UYP組和FYP組間DGGE圖譜相似性較高；聚類圖顯示,空腸和回腸中的UYP組和FYP組聚為一簇；PCA圖顯示,PCAl將空腸和回腸的UYP組和FYP組與NC組分開；空腸和回腸中UYP組和FYP組的菌群多樣性均顯著高于NC組(P0.05或P0.01);FYP較UYP更能提高空腸(P0.05)和回腸的菌群多樣性。9. rtPCR分析獺兔腸道菌群豐度表明,UYP和FYP顯著提高空腸和回腸總菌、擬桿菌門、厚壁菌門、普雷沃氏菌屬、丁酸弧菌和梭菌類型Ⅳ、XIVa(P0.01)和空腸中乳酸菌屬的豐度(P0.05),降低空腸和回腸腸球菌屬(P0.01或P0.05)和回腸中鏈球菌屬的豐度(P0.01)；FYP較UYP顯著提高回腸中總菌、厚壁菌門、丁酸弧菌(P0.01)和空腸中產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌的豐度(P0.05),降低回腸中腸桿菌科、腸球菌屬和空腸中腸球菌屬的豐度(P0.01)。10.rtPCR分析獺兔腸道屏障基因表明,FYP顯著上調(diào)空腸中p-防御素、EGF(P0.05)、TFF(P0.01)和回腸中ZO-1、封閉蛋白、p-防御素、TFF(P0.05)、PIGR和EGF(P0.01)的表達(dá)；FYP較UYP顯著提高空腸中EGF(P0.05)和回腸中ZO-1、封閉蛋白(P0.05)、PIGR和EGF(P0.01)的表達(dá)。綜上所述,UYP和FYP具有雙向體外免疫活性,并可增強(qiáng)獺兔的免疫、改善其空腸和回腸菌群結(jié)構(gòu)及屏障功能,且FYP的效果強(qiáng)于UYP。
【關(guān)鍵詞】：獺兔 玉屏風(fēng)多糖 少孢根霉菌 免疫功能 腸道菌群
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S829.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 符號(hào)說明9-12
• 1 前言12-21
• 1.1 中藥對(duì)免疫的影響12-15
• 1.1.1 中藥促進(jìn)機(jī)體生長和免疫器官發(fā)育12-13
• 1.1.2 促進(jìn)抗體形成和提高抗體含量13
• 1.1.3 促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖活性13-14
• 1.1.4 調(diào)控細(xì)胞因子合成14-15
• 1.1.5 中草藥的雙向免疫調(diào)節(jié)作用15
• 1.2 中藥對(duì)腸道菌群的影響15-16
• 1.3 中藥對(duì)腸道屏障的影響16
• 1.4 復(fù)方玉屏風(fēng)對(duì)免疫的影響16-18
• 1.5 復(fù)方玉屏風(fēng)對(duì)腸道菌群及腸道屏障的影響18
• 1.6 少孢根霉菌的應(yīng)用18-19
• 1.7 中藥合生元的研究進(jìn)展19-21
• 1.7.1 合生元的概念19
• 1.7.2 中藥合生元對(duì)免疫的影響19-20
• 1.7.3 中藥合生元對(duì)腸道菌群及腸道屏障的影響20-21
• 2 目的和意義21-22
• 3 材料與方法22-33
• 3.1 試驗(yàn)材料22
• 3.2 試驗(yàn)動(dòng)物及日糧22
• 3.3 主要試劑22
• 3.4 主要儀器22
• 3.5 試驗(yàn)方法22-32
• 3.5.1 菌種的鑒定與馴化22-24
• 3.5.2 玉屏風(fēng)多糖合生元的制備24-26
• 3.5.3 玉屏風(fēng)多糖單糖構(gòu)成測(cè)定26
• 3.5.4 小鼠免疫細(xì)胞的獲得26
• 3.5.5 細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化試驗(yàn)26-27
• 3.5.6 腹腔巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)27
• 3.5.7 腹腔巨噬細(xì)胞釋放NO試驗(yàn)27-28
• 3.5.8 實(shí)時(shí)PCR(rtPCR)測(cè)定細(xì)胞中細(xì)胞因子表達(dá)28-29
• 3.5.9 獺兔試驗(yàn)及采樣29
• 3.5.10 血清中細(xì)胞因子測(cè)定29
• 3.5.11 rtPCR分析細(xì)胞因子、TLR2和TLR4基因表達(dá)29
• 3.5.12 PCR-DGGE分析腸道菌群結(jié)構(gòu)29-31
• 3.5.13 rtPCR分析功能性菌群豐度31
• 3.5.14 rtPCR分析腸道屏障功能相關(guān)基因表達(dá)31-32
• 3.6 數(shù)據(jù)分析32-33
• 4 結(jié)果33-45
• 4.1 菌種的鑒定結(jié)果33
• 4.2 少孢根霉菌SH對(duì)玉屏風(fēng)多糖單糖組成的影響33-35
• 4.3 UYP和FYP對(duì)小鼠免疫細(xì)胞增殖活性的影響35-36
• 4.4 UYP和FYP對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬活性和合成NO的影響36-37
• 4.5 UYP和FYP對(duì)小鼠免疫細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響37-39
• 4.6 UYP和FYP對(duì)獺兔日增重和器官指數(shù)的影響39
• 4.7 UYP和FYP對(duì)獺兔脾臟細(xì)胞因子表達(dá)的影響39-40
• 4.8 UYP和FYP對(duì)獺兔血清中細(xì)胞因子濃度的影響40
• 4.9 UYP和FYP對(duì)獺兔TLR2和TLR4表達(dá)的影響40-41
• 4.10 UYP和FYP對(duì)獺兔腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響41-42
• 4.11 UYP和FYP對(duì)獺兔腸道功能性菌屬的影響42
• 4.12 UYP和FYP對(duì)獺兔空腸和回腸屏障的影響42-45
• 5 討論45-53
• 5.1 少孢根霉菌SH對(duì)玉屏風(fēng)多糖單糖組成的影響45-46
• 5.2 玉屏風(fēng)多糖合生元對(duì)免疫細(xì)胞增殖活性的影響46
• 5.3 玉屏風(fēng)多糖合生元對(duì)巨噬細(xì)胞免疫活性的影響46-47
• 5.4 玉屏風(fēng)多糖合生元體外對(duì)細(xì)胞因子等免疫相關(guān)基因的影響47-48
• 5.5 玉屏風(fēng)多糖合生元對(duì)獺兔生長及器官指數(shù)的影響48
• 5.6 玉屏風(fēng)多糖合生元對(duì)獺兔免疫功能的影響48-49
• 5.7 玉屏風(fēng)多糖合生元對(duì)獺兔腸道菌群的影響49-52
• 5.8 玉屏風(fēng)多糖合生元對(duì)獺兔腸道屏障的影響52
• 5.9 免疫、腸道菌群和腸道屏障的關(guān)系52-53
• 6 結(jié)論與展望53-54
• 6.1 結(jié)論53
• 6.2 展望53-54
• 參考文獻(xiàn)54-68
• 致謝68-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄69

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本文編號(hào)：332610