為實(shí)現(xiàn)PCV3快速定量檢測的需求,參考GenBank中已登錄的PCV3 rep基因序列設(shè)計(jì)引物,建立了PCV3 TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法,并進(jìn)一步構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,采用絕對定量法對豬的心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)組織進(jìn)行PCV3病毒載量的檢測。結(jié)果顯示,所建立的PCV3實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法具有良好的敏感性和特異性,敏感性可達(dá)16.3 copies/μL質(zhì)粒DNA。病毒載量檢測結(jié)果顯示,在肺和淋巴結(jié)中檢測到了PCV3,且淋巴結(jié)中的病毒含量明顯高于肺中的病毒含量,這表明不同組織器官中PCV3的病毒含量存在較大差異。 

【文章來源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

PCV3熒光PCR檢測質(zhì)粒的結(jié)果

經(jīng)敏感性試驗(yàn)檢測(圖2),該方法的檢測靈敏度可達(dá)16.3 copies質(zhì)粒DNA,其對應(yīng)的Ct值為37.65。2.3 PCV3實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法的特異性檢測結(jié)果

經(jīng)檢測,得到PCV3實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖4),方程式為:y=-3.431 8x+41.666,其擴(kuò)增效率為95.6%,反應(yīng)相關(guān)系數(shù)為0.998 8,符合熒光定量的要求,可以用于PCV3病毒的絕對定量分析。對病豬的心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)進(jìn)行PCV3實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測,反應(yīng)結(jié)束后,分別記錄Ct值,計(jì)算出平均Ct值,根據(jù)絕對定量方法計(jì)算不同組織器官中PCV3的病毒載量。結(jié)果顯示(表1),僅在肺和淋巴結(jié)中檢測到了PCV3,而且淋巴結(jié)中的病毒載量是肺中的70.8倍。圖4 PCV3熒光定量PCR檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3332092