維氏氣單胞菌（Aeromonas veronii,AV）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種可引起人及多種水生生物發(fā)病的人-獸-魚共患的病原菌,廣泛存在于自然界水域、土壤和水生動物體中。外膜蛋白W（OmpW）作為維氏氣單胞菌的黏附素,是一種潛在的保護性抗原,可以作為基因工程疫苗候選抗原進行試驗。乳酸菌是一種公認的益生菌,能夠耐受機體的防御機制,通過口服方式,進入機體內(nèi)可大量存活,并且與腸道粘膜緊密相連,起到調(diào)節(jié)腸內(nèi)菌群平衡、增強機體免疫力等益生功能。因此,研制以干酪乳桿菌作為維氏氣單胞菌疫苗抗原呈遞的載體有非常重要的意義。本研究將預防獸醫(yī)學研究室保存的維氏氣單胞菌OmpW基因重組干酪乳桿菌分泌表達型Lc-pPG612-OmpW和細胞表面表達型Lc-MCS-OmpW進行驗證,通過PCR、雙酶切和Western blotting驗證OmpW基因在乳桿菌中的表達情況。結(jié)果顯示,經(jīng)PCR擴增出約600 bp的OmpW基因片段,兩種重組乳桿菌表達的約22 kDa的蛋白均具有良好的反應(yīng)原性。為檢驗構(gòu)建的重組菌是否能誘導黏膜和系統(tǒng)免疫應(yīng)答,本試驗以鯽魚作為試驗動物進行免疫學試驗。將Lc-pPG612-OmpW和Lc-... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學吉林省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒鑒定M：DNA標準分子量1-5：Lc-pPG612-OmpW基因PCR產(chǎn)物

15圖 1-2 重組干酪乳桿菌的檢測結(jié)果（A：Lc-pPG612-OmpW；B：Lc-MCS-OmpW）A：M：DNA 標準分子量；1-2：Lc-pPG612-OmpW 雙酶切產(chǎn)物B：M：DNA 標準分子量；1-2：Lc-MCS-OmpW 雙酶切產(chǎn)物Fig.1-2 The identification of recombinant Lc.casei(A: Lc-pPG612-OmpW; B: Lc-MCS-OmpW)A: M: DL5000 DNA Marker; 1-2: plasmid Lc-pPG612-OmpWB: M: DL5000 DNA Marker; 1-2: plasmid Lc-MCS-OmpW

.2.2 蛋白水平驗證將重組干酪乳桿菌 Lc-MCS-OmpW 和 Lc-pPG612-OmpW 誘導表達后，利抗維氏氣單胞菌 TH0426 株血清作為一抗，山羊抗小鼠 IgG 作為二抗，進estern blotting 鑒定，Lc-pPG612 進行誘導表達作為對照，在 22kDa 處出現(xiàn)印小與預期相符，表明重組干酪乳桿菌能表達目的蛋白。而 Lc-pPG612 空載明顯條帶，表明抗維氏氣單胞菌血清能識別 OmpW 蛋白，結(jié)果見圖 1-3。


本文編號：3326492