本研究使用Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)小反芻獸疫病毒西藏分離株Tibet07的H、F、M、P四個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白，并對(duì)其進(jìn)行鑒定。擴(kuò)增小反芻獸疫病毒Tibet07株H、F、M、P基因，克隆至pFastBac/CT-TOPO載體中，構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒pFastBac-PPRV-H、F、M、P，轉(zhuǎn)化DH10bac大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，獲得重組桿狀病毒質(zhì)粒Bacmid-PPRV-H、F、M、P，轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞，獲得重組桿狀病毒。擴(kuò)增重組桿狀病毒至P3代，使用該桿狀病毒以MOI=5的病毒量感染sf9細(xì)胞表達(dá)蛋白。通過(guò)SDS-PAGE和Western blot鑒定H、F、M、P蛋白的表達(dá)。經(jīng)鑒定各蛋白的條帶與預(yù)期的分子質(zhì)量大小相符。感染重組桿狀病毒的昆蟲細(xì)胞，經(jīng)間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)鑒定，均可見較強(qiáng)的熒光。結(jié)果表明，使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了小反芻獸疫病毒西藏分離株Tibet07的H、F、M、P蛋白，各蛋白均可與山羊PPR陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng)，表明各表達(dá)蛋白均有一定的反應(yīng)原性。為進(jìn)一步研究其生物學(xué)功能、篩選單抗、研究小反芻獸疫西藏分離株生物學(xué)特性等，奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

成熟的PPRV結(jié)構(gòu)圖（引自劉拂曉畢業(yè)論文）

1975197619781983198619881989199319941995199619982004200520072008200920102011NigeriaNigeriaGhanaOmanUnited Arab EmiratesBurkina FasoC te d’IvoireIsraelIndiaIsraelTurkeyIranTajikistanSudanChinaMoroccoSudanPakistanKurdistanNigeria 75/2Accre/76Chana 78Ibri/83Dorcas/86Burkina Faso 88C te d’Ivoire 89Arbella/93India 94Israel 95/3Turkey 96Iran 98Tajikistan 04Atbara-NSUD05-1Tibet0701Morocco08-11Rabak-BNSUD09Pak MuLtan 2010Kurdistan/2011DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401HQ1319EU0687HQ1319HQ1319JN0096JF9697

統(tǒng)簡(jiǎn)介bacuLovirus expression system，B幼蟲作為受體來(lái)表達(dá)目的蛋白的真點(diǎn)特異性轉(zhuǎn)座使外源基因轉(zhuǎn)座至狀病毒的方法[84]，使用同源重組的為桿狀病毒基因組英文全名為“baife Technologies 公司商品化，商品毒表達(dá)系統(tǒng)粒，具有多角體蛋白啟動(dòng)子，使Bac 載體有慶大霉素抗性（Gen+）FastBac CT-TOPO 載體圖譜。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]小反芻獸疫病毒樣顆粒的構(gòu)建及對(duì)小鼠免疫效力的評(píng)價(jià)[D]. 劉拂曉.吉林大學(xué) 2013
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本文編號(hào)：3318957