本研究使用Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)表達小反芻獸疫病毒西藏分離株Tibet07的H、F、M、P四個結(jié)構(gòu)蛋白，并對其進行鑒定。擴增小反芻獸疫病毒Tibet07株H、F、M、P基因，克隆至pFastBac/CT-TOPO載體中，構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒pFastBac-PPRV-H、F、M、P，轉(zhuǎn)化DH10bac大腸桿菌感受態(tài)細胞，獲得重組桿狀病毒質(zhì)粒Bacmid-PPRV-H、F、M、P，轉(zhuǎn)染sf9細胞，獲得重組桿狀病毒。擴增重組桿狀病毒至P3代，使用該桿狀病毒以MOI=5的病毒量感染sf9細胞表達蛋白。通過SDS-PAGE和Western blot鑒定H、F、M、P蛋白的表達。經(jīng)鑒定各蛋白的條帶與預(yù)期的分子質(zhì)量大小相符。感染重組桿狀病毒的昆蟲細胞，經(jīng)間接免疫熒光實驗鑒定，均可見較強的熒光。結(jié)果表明，使用桿狀病毒表達系統(tǒng)成功表達了小反芻獸疫病毒西藏分離株Tibet07的H、F、M、P蛋白，各蛋白均可與山羊PPR陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)，表明各表達蛋白均有一定的反應(yīng)原性。為進一步研究其生物學功能、篩選單抗、研究小反芻獸疫西藏分離株生物學特性等，奠定了實驗基礎(chǔ)。 

【文章來源】：新疆農(nóng)業(yè)大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

成熟的PPRV結(jié)構(gòu)圖（引自劉拂曉畢業(yè)論文）

1975197619781983198619881989199319941995199619982004200520072008200920102011NigeriaNigeriaGhanaOmanUnited Arab EmiratesBurkina FasoC te d’IvoireIsraelIndiaIsraelTurkeyIranTajikistanSudanChinaMoroccoSudanPakistanKurdistanNigeria 75/2Accre/76Chana 78Ibri/83Dorcas/86Burkina Faso 88C te d’Ivoire 89Arbella/93India 94Israel 95/3Turkey 96Iran 98Tajikistan 04Atbara-NSUD05-1Tibet0701Morocco08-11Rabak-BNSUD09Pak MuLtan 2010Kurdistan/2011DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401DQ8401HQ1319EU0687HQ1319HQ1319JN0096JF9697

統(tǒng)簡介bacuLovirus expression system，B幼蟲作為受體來表達目的蛋白的真點特異性轉(zhuǎn)座使外源基因轉(zhuǎn)座至狀病毒的方法[84]，使用同源重組的為桿狀病毒基因組英文全名為“baife Technologies 公司商品化，商品毒表達系統(tǒng)粒，具有多角體蛋白啟動子，使Bac 載體有慶大霉素抗性（Gen+）FastBac CT-TOPO 載體圖譜。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小反芻獸疫病毒H基因在桿狀病毒中的表達[J]. 高華峰,信愛國,高林,楊仕標.  中國動物傳染病學報. 2012(01)
[2]中國西藏小反芻獸疫的發(fā)生狀況與防控[J]. 王樂元,次真,吳國珍,安榮祥,周明,多杰熱登,蔡斌.  畜牧獸醫(yī)學報. 2011(05)
[3]中國西藏小反芻獸疫病毒野生株China/Tib/Gej/07-30基質(zhì)蛋白基因和融合蛋白基因的分子特征分析[J]. 包靜月,趙文姬,王志亮,李林,吳國珍,吳曉東,劉春菊,王君瑋,劉雨田,李金明,王英麗.  病毒學報. 2010(04)
[4]小反芻獸疫病毒Nigeria75/1株F基因的克隆與原核表達[J]. 楊帆,竇永喜,朱學亮,駱學農(nóng),岳城,才學鵬.  中國獸醫(yī)科學. 2009(06)
[5]小反芻獸疫研究進展[J]. 信愛國,楊仁標,向文彬.  中國預(yù)防獸醫(yī)學報. 2003(02)

博士論文
[1]小反芻獸疫病毒樣顆粒的構(gòu)建及對小鼠免疫效力的評價[D]. 劉拂曉.吉林大學 2013
[2]小反芻獸疫病毒血凝素蛋白及其受體的研究[D]. 蒙學蓮.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012



本文編號：3318957