發(fā)布時(shí)間：2021-08-02 23:41

　　牛傳染性鼻氣管炎（IBR）又名“紅鼻病”,是由牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）引起的接觸性傳染病。該病廣泛分布于世界各地,且具有廣泛的組織嗜性,臨床上主要以呼吸道癥狀和繁殖障礙為特征。近年來,該病的病發(fā)率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢,給養(yǎng)牛業(yè)帶來了不可估量的經(jīng)濟(jì)損失。gB蛋白為IBRV中最保守且是免疫反應(yīng)最主要的蛋白之一,是進(jìn)行IBRV診斷首選的特異性抗原之一�；谝陨系难芯�,本試驗(yàn)做了以下三方面的工作:1..IBRV部分gB蛋白的原核表達(dá)及純化為了獲得大量的gB蛋白用于后續(xù)IBRV檢測方法的建立,本試驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)室保存的構(gòu)建好的gB重組陽性質(zhì)粒利用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),并對誘導(dǎo)條件（誘導(dǎo)時(shí)間及IPTG濃度）實(shí)施了優(yōu)化,利用SDS-PAGE分析了表達(dá)蛋白的可溶性,最后使用His標(biāo)簽親和鎳柱層析對表達(dá)的蛋白進(jìn)行了純化和免疫印跡檢測。結(jié)果表明,重組蛋白得以表達(dá),大小為32.4KDa,與預(yù)期一致,且在IPTG濃度為0.5mM誘導(dǎo)4h時(shí)gB蛋白獲得高效表達(dá),存在形式主要為包涵體。純化的gB蛋白經(jīng)測定其濃度為1.84mg/mL,Western blot結(jié)果驗(yàn)證,表達(dá)的蛋白能夠特異性識(shí)別IBR標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。本研... 

【文章來源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２?ｇＢ蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間的優(yōu)化??Ｆｉｇ．２－２?Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?ｏｆ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｇＢ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??

寧夏大學(xué)碩士學(xué)位論文?第二章ＩＢＲＶ部分ｇＢ蛋白的原核表達(dá)及純化??有少量的可溶性蛋白（圖２－３）。??ＫＤ?Ｍ?１?２?３?４??７，；ｒ｜??ｍ￣愈繼尊齡?Ｉ??ｌｌｉＳｌｆｌ??二ｃ?－－－??圖２－３?ｇＢ重組蛋白的可溶性分析??Ｆｉｇ．２－３?Ｓｏｌｕｂｌｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｇＢ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??Ｍ：蛋白質(zhì)彩虹Ｍａｒｋｅｒ；?１：未經(jīng)ＩＰＴＧ誘導(dǎo)的重組蛋白；２－４：誘導(dǎo)后的ＰＥＴ３２ａ－ｇＢ陽性菌的全菌，上清和沉??淀??Ｍ：?ＰａｇｅＲｕｌｅｒ?Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ?Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｌａｄｄｅｒ；?１：?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｎｏｔ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＩＰＴＧ；??２－４：?Ｗｈｏｌｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ，?ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ?ａｎｄ?ｓｅｄｉｍｅｎｔ?ｏｆ?ＰＥＴ３２ａ－ｇＢ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ａｆｔｅｒ?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ??２．?３．?３?ｇＢ重組蛋白的分離純化??根據(jù)ｇＢ蛋白的表達(dá)特性和最佳的誘導(dǎo)條件進(jìn)行表達(dá)純化，得到了一條大小約為３２．４ｋＤａ??大小的純度較高的條帶（如圖２－４）。??ＫＤ?Ｍ?１??ＷＷＷＷＷＷＷＷＷＷ??１３??１００—?９Ｗ??７〇－ｍｍ??４０—??

寧夏大學(xué)碩士學(xué)位論文?第二章ＩＢＲＶ部分ｇＢ蛋白的原核表達(dá)及純化??有少量的可溶性蛋白（圖２－３）。??ＫＤ?Ｍ?１?２?３?４??７，；ｒ｜??ｍ￣愈繼尊齡?Ｉ??ｌｌｉＳｌｆｌ??二ｃ?－－－??圖２－３?ｇＢ重組蛋白的可溶性分析??Ｆｉｇ．２－３?Ｓｏｌｕｂｌｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｇＢ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??Ｍ：蛋白質(zhì)彩虹Ｍａｒｋｅｒ；?１：未經(jīng)ＩＰＴＧ誘導(dǎo)的重組蛋白；２－４：誘導(dǎo)后的ＰＥＴ３２ａ－ｇＢ陽性菌的全菌，上清和沉??淀??Ｍ：?ＰａｇｅＲｕｌｅｒ?Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ?Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｌａｄｄｅｒ；?１：?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｎｏｔ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＩＰＴＧ；??２－４：?Ｗｈｏｌｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ，?ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ?ａｎｄ?ｓｅｄｉｍｅｎｔ?ｏｆ?ＰＥＴ３２ａ－ｇＢ?ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ａｆｔｅｒ?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ??２．?３．?３?ｇＢ重組蛋白的分離純化??根據(jù)ｇＢ蛋白的表達(dá)特性和最佳的誘導(dǎo)條件進(jìn)行表達(dá)純化，得到了一條大小約為３２．４ｋＤａ??大小的純度較高的條帶（如圖２－４）。??ＫＤ?Ｍ?１??ＷＷＷＷＷＷＷＷＷＷ??１３??１００—?９Ｗ??７〇－ｍｍ??４０—??


本文編號(hào)：3318496