2’-5’寡腺苷合成酶（2’-5’oligoadenylate synthetases,OAS）是哺乳動(dòng)物先天性免疫系統(tǒng)的重要成分,OAS蛋白傳統(tǒng)上認(rèn)為是細(xì)胞內(nèi)的抗病毒蛋白。它的本質(zhì)是一種干擾素誘導(dǎo)的抗病毒蛋白。細(xì)胞內(nèi)的OAS/RNaseL信號(hào)通路在宿主控制黃病毒、呼腸孤病毒和腦心肌炎病毒的先天性免疫反應(yīng)中起重要作用。此外,近年來(lái)已有研究證實(shí)OAS存在不依賴于RNaseL途徑的抗病毒作用。OAS蛋白能直接抑制病毒增殖而不需要已知的抗病毒信號(hào)通道的激活。小鼠、馬和人中均發(fā)現(xiàn)OAS基因是抗黃病毒感染的生物標(biāo)志基因,豬源與人源OAS1蛋白的氨基酸同源性為73%,具有相似的酶學(xué)特征,因此進(jìn)一步研究豬是否也存在抗黃病毒（JEV）感染的生物標(biāo)記基因以及OAS基因是否就是豬感染JEV致病的風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)志基因是必要的。鑒于日本乙型腦炎在中國(guó)的嚴(yán)重危害及其傳播范圍廣泛；JEV疾病給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,以及豬作為中間宿主在JEV傳播過(guò)程中的重要作用,研究豬OAS在抗JEV感染中的作用及其分子機(jī)理具有重要的意義。本研究設(shè)計(jì)方案主要包括以下幾個(gè)內(nèi)容：1.重組OAS1蛋白的可溶性表達(dá)與純化根據(jù)已發(fā)表的豬源OA... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 OAS抗病毒功能研究進(jìn)展
        1 OAS家族的基因組成
            1.1 人類(lèi)的OAS基因組成
            1.2 豬的OAS基因組成
            1.3 小鼠的OAS基因組成
        2 OAS蛋白的結(jié)構(gòu)
        3 OAS的生物學(xué)功能以及催化作用機(jī)制研究
            3.1 OAS的生物學(xué)功能：OAS獨(dú)特的2’聚合酶活性以及OAS蛋白的來(lái)源
            3.2 OAS的催化作用機(jī)制
        4 OAS蛋白家族抗病毒的分子機(jī)制研究進(jìn)展
            4.1 OAS蛋白家族成員依賴于RNaseL途徑的抗病毒作用
            4.2 OAS蛋白家族成員非依賴于RNaseL途徑的抗病毒作用
        5 OAS蛋白與臨床疾病的關(guān)系
        6 有關(guān)OAS蛋白研究的前景展望
    第二章 日本乙型腦炎的研究背景
        1 日本乙型腦炎病毒的病原學(xué)特征及其理化特性
        2 日本乙型腦炎的流行以及流行的模式
        3 日本乙型腦炎病毒的擴(kuò)散
        4 日本乙型腦炎的毒力影響因素和致病機(jī)理
            4.1 毒力影響因素
            4.2 致病機(jī)理
        5 流行性乙型腦炎病毒的生物合成
        6 流行性乙型腦炎疫苗的相關(guān)研究
        7 流行性乙型腦炎的診斷技術(shù)概況
        8 流行性乙型腦炎綜合防治管理的有效措施
            8.1 積極宣傳
            8.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理措施
            8.3 加強(qiáng)預(yù)防措施
            8.4 免疫接種防治結(jié)合
            8.5 對(duì)癥治療措施
            8.6 加強(qiáng)監(jiān)測(cè)
        9 流行性乙型腦炎疫苗的前景展望
        參考文獻(xiàn)
第二篇 實(shí)驗(yàn)部分
    第三章 重組OAS1的可溶性表達(dá)與理化特性研究
        摘要
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 材料
            1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.3 主要試劑與工具酶
            1.4 主要儀器設(shè)備
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 豬源OAS1基因的引物設(shè)計(jì)與合成
            2.2 提取PK-15細(xì)胞的總RNA
            2.3 豬源OAS1目的基因的RT-PCR擴(kuò)增
            2.4 豬源OAS1目的基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建：連接及轉(zhuǎn)化
            2.5 重組OAS1蛋白的可溶性誘導(dǎo)表達(dá)純化
            2.6 重組OAS1蛋白的Western blot分析鑒定
            2.7 制備重組OAS1蛋白多克隆抗體并利用Western blot方法鑒定其反應(yīng)原性
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 豬源OAS1基因克隆與序列分析
            3.2 豬源OAS1原核表達(dá)重組質(zhì)粒的構(gòu)建
            3.3 豬源OAS1蛋白在大腸桿菌Rosetta2中的表達(dá)與純化
            3.4 豬源OAS1蛋白免疫小鼠制備多克隆抗體
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第四章 重組OAS1蛋白抗病毒特性研究
        摘要
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞和毒株
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 重組OAS1蛋白的脫鹽處理,濃度測(cè)定以及其對(duì)細(xì)胞毒性的檢測(cè)
            2.2 重組OAS1蛋白抗病毒譜的測(cè)定
            2.3 重組OAS1蛋白抑制病毒感染細(xì)胞的最佳時(shí)機(jī)分析
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 重組OAS1蛋白的脫鹽處理,濃度測(cè)定以及其對(duì)細(xì)胞毒性的檢測(cè)
            3.2 重組OAS1蛋白抗病毒譜的測(cè)定
            3.3 重組OAS1蛋白抑制病毒感染細(xì)胞的最佳時(shí)機(jī)分析
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstract
    第五章 重組OAS1抗日本腦炎病毒的作用機(jī)制研究
        摘要
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞和毒株
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 重組OAS1蛋白對(duì)JEV吸附和入胞的影響
            2.2 重組OAS1蛋白對(duì)JEV在細(xì)胞中早期增殖的影響
            2.3 重組OAS1蛋白在BHK-21細(xì)胞系上對(duì)JEV子代病毒感染效率的影響
            2.4 重組OAS1aD74A/D76A原核表達(dá),純化以及在BHK-21細(xì)胞系上抗JEV的活性測(cè)定
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 重組OAS1蛋白對(duì)JEV吸附和入胞的影響
            3.2 重組OAS1蛋白對(duì)JEV在細(xì)胞中早期增殖的影響
            3.3 重組OAS1蛋白在BHK-21細(xì)胞系上對(duì)JEV子代病毒感染效率的影響
            3.4 重組OAS1aD74A/D76A原核表達(dá),純化以及在BHK-21細(xì)胞系上抗JEV的活性測(cè)定
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
全文總結(jié)
致謝



本文編號(hào)：3318510