本論文研究了C型鈉肽（C-type natriuretic peptide,CNP）預處理對綿羊卵母細胞減數(shù)分裂阻滯和后續(xù)發(fā)育能力的影響,以及對綿羊卵母細胞成熟前后母源基因和卵丘細胞擴展相關基因表達的影響。研究結(jié)果如下:1.綿羊卵母細胞用含有200 nM CNP的TCM199分別處理0 h,2 h,4 h,6 h,或8 h,通過DAPI染色檢測卵母細胞經(jīng)不同時間培養(yǎng)后所處GV期比例。結(jié)果表明CNP可在4 h內(nèi)有效的維持卵母細胞減數(shù)分裂阻滯。以體外成熟（In vitro maturation,IVM）24 h為對照組,研究CNP預處理組（200 nmol/L CNP預處理4 h然后體外成熟24 h）中卵母細胞經(jīng)孤雌激活（Parthenogenetic activation,PA）后的發(fā)育情況。結(jié)果表明,CNP預處理組中孤雌胚胎囊胚率（43.44%）顯著高于對照組（31.72%,P<0.05）;而兩組間的卵裂率和囊胚細胞數(shù)相似。2.以IVM 24 h為對照組,200 nmol/L CNP預處理4 h然后體外成熟24 h作為CNP預處理組,通過RT-qPCR檢測綿羊卵母細胞中母源基因D... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 卵母細胞成熟
        1.1.1 細胞核成熟
        1.1.2 細胞質(zhì)成熟
        1.1.3 胞質(zhì)成熟時細胞器的變化
        1.1.4 胞質(zhì)成熟時細胞骨架的變化
    1.2 CNP對卵母細胞成熟的影響
        1.2.1 C型鈉肽簡介
        1.2.2 CNP對卵母細胞減數(shù)分裂阻滯的影響
        1.2.3 CNP在卵母細胞體外成熟中的應用
    1.3 母源基因Mater、Zar1和Dnmt1概述
    1.4 顆粒細胞擴展相關基因HAS2、PTX3和PTGS2概述
    1.5 研究目的及意義
    1.6 技術路線
2 CNP預處理對綿羊卵母細胞減數(shù)分裂阻滯及發(fā)育能力的影響
    2.1 材料
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 液體配制
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 耗材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 卵母細胞收集
        2.2.2 C型鈉肽預處理及卵母細胞核相檢測
        2.2.3 卵母細胞體外成熟、孤雌激活及體外胚胎培養(yǎng)
        2.2.4 囊胚細胞數(shù)鑒定
        2.2.5 統(tǒng)計分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 CNP預處理對綿羊卵母細胞減數(shù)分裂阻滯的影響
        2.3.2 CNP預處理對綿羊孤雌胚胎發(fā)育的影響
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
3 C型鈉肽預處理對綿羊卵母細胞成熟前后母源基因Dnmt1,Zar1和Mater表達的影響
    3.1 材料
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 液體配制
        3.1.4 實驗儀器
        3.1.5 耗材
    3.2 實驗方法
        3.2.1 卵母細胞的收集
        3.2.2 C型鈉肽預處理及卵母細胞體外成熟
        3.2.3 PCR引物的設計與合成
        3.2.4 卵母細胞RNA提取及實時熒光定量PCR
        3.2.5 統(tǒng)計分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 β-actin,Dnmt1,Zar1和Mater標準曲線狀況
        3.3.2 Dnmt1,Zar1,Mater和β-actin擴增曲線分析
        3.3.3 Dnmt1,Zar1,Mater和β-actin溶解曲線分析
        3.3.4 實時熒光定量PCR產(chǎn)物特異性檢測
        3.3.5 卵母細胞成熟過程中CNP預處理對Dnmt1表達的影響
        3.3.6 卵母細胞成熟過程中CNP預處理對Zar1表達的影響
        3.3.7 卵母細胞成熟過程中CNP預處理對Mater表達的影響
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
4 CNP預處理對綿羊卵母細胞成熟前后卵丘細胞擴展相關基因PTGS2、HAS2和PTX3表達的影響
    4.1 材料
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 液體配制
        4.1.4 實驗儀器
        4.1.5 耗材
    4.2 實驗方法
        4.2.1 卵母細胞的收集
        4.2.2 C型鈉肽預處理及卵母細胞體外成熟
        4.2.3 PCR引物的設計與合成
        4.2.4 卵母細胞RNA提取及實時熒光定量PCR
        4.2.5 統(tǒng)計分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 β-actin、PTGS2、HAS2和PTX3標準曲線狀況
        4.3.2 β-actin、PTGS2、HAS2和PTX3擴增曲線分析
        4.3.3 β-actin、PTGS2、HAS2和PTX3溶解曲線分析
        4.3.4 實時熒光定量PCR產(chǎn)物特異性檢測
        4.3.5 卵母細胞成熟過程中CNP預處理對PTGS2表達的影響
        4.3.6 卵母細胞成熟過程中CNP預處理對HAS2表達的影響
        4.3.7 卵母細胞成熟過程中CNP預處理對PTX3表達的影響
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
5 總結(jié)
致謝
參考文獻
作者簡介



本文編號：3317213