本論文研究了C型鈉肽（C-type natriuretic peptide,CNP）預(yù)處理對綿羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯和后續(xù)發(fā)育能力的影響,以及對綿羊卵母細(xì)胞成熟前后母源基因和卵丘細(xì)胞擴(kuò)展相關(guān)基因表達(dá)的影響。研究結(jié)果如下:1.綿羊卵母細(xì)胞用含有200 nM CNP的TCM199分別處理0 h,2 h,4 h,6 h,或8 h,通過DAPI染色檢測卵母細(xì)胞經(jīng)不同時間培養(yǎng)后所處GV期比例。結(jié)果表明CNP可在4 h內(nèi)有效的維持卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯。以體外成熟（In vitro maturation,IVM）24 h為對照組,研究CNP預(yù)處理組（200 nmol/L CNP預(yù)處理4 h然后體外成熟24 h）中卵母細(xì)胞經(jīng)孤雌激活（Parthenogenetic activation,PA）后的發(fā)育情況。結(jié)果表明,CNP預(yù)處理組中孤雌胚胎囊胚率（43.44%）顯著高于對照組（31.72%,P<0.05）;而兩組間的卵裂率和囊胚細(xì)胞數(shù)相似。2.以IVM 24 h為對照組,200 nmol/L CNP預(yù)處理4 h然后體外成熟24 h作為CNP預(yù)處理組,通過RT-qPCR檢測綿羊卵母細(xì)胞中母源基因D... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 卵母細(xì)胞成熟
        1.1.1 細(xì)胞核成熟
        1.1.2 細(xì)胞質(zhì)成熟
        1.1.3 胞質(zhì)成熟時細(xì)胞器的變化
        1.1.4 胞質(zhì)成熟時細(xì)胞骨架的變化
    1.2 CNP對卵母細(xì)胞成熟的影響
        1.2.1 C型鈉肽簡介
        1.2.2 CNP對卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的影響
        1.2.3 CNP在卵母細(xì)胞體外成熟中的應(yīng)用
    1.3 母源基因Mater、Zar1和Dnmt1概述
    1.4 顆粒細(xì)胞擴(kuò)展相關(guān)基因HAS2、PTX3和PTGS2概述
    1.5 研究目的及意義
    1.6 技術(shù)路線
2 CNP預(yù)處理對綿羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯及發(fā)育能力的影響
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗材料
        2.1.2 實(shí)驗試劑
        2.1.3 液體配制
        2.1.4 實(shí)驗儀器
        2.1.5 耗材
    2.2 實(shí)驗方法
        2.2.1 卵母細(xì)胞收集
        2.2.2 C型鈉肽預(yù)處理及卵母細(xì)胞核相檢測
        2.2.3 卵母細(xì)胞體外成熟、孤雌激活及體外胚胎培養(yǎng)
        2.2.4 囊胚細(xì)胞數(shù)鑒定
        2.2.5 統(tǒng)計分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 CNP預(yù)處理對綿羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的影響
        2.3.2 CNP預(yù)處理對綿羊孤雌胚胎發(fā)育的影響
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
3 C型鈉肽預(yù)處理對綿羊卵母細(xì)胞成熟前后母源基因Dnmt1,Zar1和Mater表達(dá)的影響
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗材料
        3.1.2 實(shí)驗試劑
        3.1.3 液體配制
        3.1.4 實(shí)驗儀器
        3.1.5 耗材
    3.2 實(shí)驗方法
        3.2.1 卵母細(xì)胞的收集
        3.2.2 C型鈉肽預(yù)處理及卵母細(xì)胞體外成熟
        3.2.3 PCR引物的設(shè)計與合成
        3.2.4 卵母細(xì)胞RNA提取及實(shí)時熒光定量PCR
        3.2.5 統(tǒng)計分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 β-actin,Dnmt1,Zar1和Mater標(biāo)準(zhǔn)曲線狀況
        3.3.2 Dnmt1,Zar1,Mater和β-actin擴(kuò)增曲線分析
        3.3.3 Dnmt1,Zar1,Mater和β-actin溶解曲線分析
        3.3.4 實(shí)時熒光定量PCR產(chǎn)物特異性檢測
        3.3.5 卵母細(xì)胞成熟過程中CNP預(yù)處理對Dnmt1表達(dá)的影響
        3.3.6 卵母細(xì)胞成熟過程中CNP預(yù)處理對Zar1表達(dá)的影響
        3.3.7 卵母細(xì)胞成熟過程中CNP預(yù)處理對Mater表達(dá)的影響
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
4 CNP預(yù)處理對綿羊卵母細(xì)胞成熟前后卵丘細(xì)胞擴(kuò)展相關(guān)基因PTGS2、HAS2和PTX3表達(dá)的影響
    4.1 材料
        4.1.1 實(shí)驗材料
        4.1.2 實(shí)驗試劑
        4.1.3 液體配制
        4.1.4 實(shí)驗儀器
        4.1.5 耗材
    4.2 實(shí)驗方法
        4.2.1 卵母細(xì)胞的收集
        4.2.2 C型鈉肽預(yù)處理及卵母細(xì)胞體外成熟
        4.2.3 PCR引物的設(shè)計與合成
        4.2.4 卵母細(xì)胞RNA提取及實(shí)時熒光定量PCR
        4.2.5 統(tǒng)計分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 β-actin、PTGS2、HAS2和PTX3標(biāo)準(zhǔn)曲線狀況
        4.3.2 β-actin、PTGS2、HAS2和PTX3擴(kuò)增曲線分析
        4.3.3 β-actin、PTGS2、HAS2和PTX3溶解曲線分析
        4.3.4 實(shí)時熒光定量PCR產(chǎn)物特異性檢測
        4.3.5 卵母細(xì)胞成熟過程中CNP預(yù)處理對PTGS2表達(dá)的影響
        4.3.6 卵母細(xì)胞成熟過程中CNP預(yù)處理對HAS2表達(dá)的影響
        4.3.7 卵母細(xì)胞成熟過程中CNP預(yù)處理對PTX3表達(dá)的影響
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
5 總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介



本文編號：3317213