豬胚胎工程在畜牧業(yè)、醫(yī)學(xué)、生物學(xué)基礎(chǔ)研究等方面均具有重要的科學(xué)意義和廣闊的應(yīng)用前景。但作為影響豬胚胎早期發(fā)育效率與質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一,豬胚胎體外培養(yǎng)體系仍然不理想。已知作為TGF-P超家族的一員,卵泡抑素（Follistatin, FST）可有效地促進(jìn)牛和猴子早期胚胎的發(fā)育。然而FST對(duì)豬早期胚胎發(fā)育是否有作用鮮有報(bào)道。為了深入探討FST對(duì)豬早期胚胎體外發(fā)育的影響,完善豬胚胎體外培養(yǎng)方案,本研究開展了如下試驗(yàn)：試驗(yàn)一：為了探明FST對(duì)體外胚胎形成可能的分子機(jī)制,我們檢測(cè)了豬卵母細(xì)胞和不同發(fā)育階段的豬孤雌激活胚（parthenogenetic activation embryo, PAE）>體外受精胚（in vitro fertilization embyo, IVFE）中 FST mRNA的表達(dá)豐度及其蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)模式。實(shí)時(shí)熒光定量PCR （Real-time Quantitative PCR, RT-qPCR）結(jié)果顯示,豬卵母細(xì)胞和早期胚胎的各個(gè)發(fā)育階段均有FST mRNA的表達(dá)。FST mRNA隨著成熟時(shí)間的延長而緩慢上升,在PAEs和IVFEs的2、4和8-cell階段表... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
文獻(xiàn)綜述
    1. 豬胚胎體外培養(yǎng)的研究進(jìn)展
        1.1 豬胚胎體外培養(yǎng)的簡要回顧
        1.2 胚胎體外培養(yǎng)的應(yīng)用前景
        1.3 影響豬胚胎體外培養(yǎng)的因素
            1.3.1 卵母細(xì)胞來源
            1.3.2 篩選優(yōu)質(zhì)的卵母細(xì)胞
            1.3.3 卵母細(xì)胞的體外成熟
            1.3.4 胚胎培養(yǎng)基
            1.3.5 培養(yǎng)添加物
            1.3.6 培養(yǎng)氣相
    2. 卵泡抑素(Follistatin,FST)的研究進(jìn)展
        2.1 FST基因的結(jié)構(gòu)定位
        2.2 FST組織分布及表達(dá)
        2.3 FST的生物學(xué)作用
            2.3.1 FST的結(jié)合作用
            2.3.2 不同F(xiàn)ST蛋白亞型表現(xiàn)出不同的生物學(xué)功能
            2.3.3 FST對(duì)卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞成熟的影響
            2.3.4 FST在胚胎發(fā)育及分化過程中的作用
    結(jié)語
引言
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.1 材料
        1.1.2 主要儀器
        1.1.3 主要耗材
        1.1.4 所需試劑及溶液配制
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 豬卵母細(xì)胞體外成熟
        1.2.2 脫卵丘
        1.2.3 豬卵母細(xì)胞孤雌激活
        1.2.4 豬卵母細(xì)胞體外受精
        1.2.5 傳統(tǒng)豬體細(xì)胞核移植技術(shù)
        1.2.6 間接免疫熒光染色技術(shù)
        1.2.7 豬卵母細(xì)胞及胚胎的RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        1.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)
        1.2.9 統(tǒng)計(jì)分析
    1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
2 結(jié)果
    2.1 豬卵母細(xì)胞和早期胚胎中FST mRNA和蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)模式
        2.1.1 豬卵母細(xì)胞和著床前胚胎各個(gè)發(fā)育階段FST mRNA的表達(dá)豐度
        2.1.2 豬卵母細(xì)胞和早期胚胎各個(gè)發(fā)育階段FST蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)
    2.2 添加不同亞型FST蛋白對(duì)豬PAEs著床前體外發(fā)育的影響
        2.2.1 添加不同亞型FST蛋白對(duì)早期卵裂率和總卵裂率的影響
        2.2.2 在不同階段添加不同亞型FST對(duì)于豬PAEs囊胚形成率及囊胚質(zhì)量的影響
    2.3 添加不同濃度FST-315蛋白對(duì)豬PAEs、NTEs著床前體外發(fā)育的影響
        2.3.1 添加不同濃度FST-315蛋白對(duì)豬PAEs著床前體外發(fā)育的影響
        2.3.2 添加不同濃度FST-315蛋白對(duì)豬NTEs著床前體外發(fā)育的影響
    2.4 不同時(shí)間添加FST-300蛋白對(duì)豬PAEs著床前體外發(fā)育的影響
    2.5 添加不同濃度FST-300蛋白對(duì)豬NTEs著床前體外發(fā)育的影響
3 討論
    3.1 關(guān)于FST mRNA和蛋白在早期胚胎中的表達(dá)
    3.2 關(guān)于不同亞型FST蛋白的作用
    3.3 關(guān)于FST蛋白的添加時(shí)間
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]亮甲酚藍(lán)染色篩選及曲古抑菌素A對(duì)東北野豬核移植胚發(fā)育的影響[J]. 付博,劉娣,馬紅,何鑫淼,吳賽輝,馬建章,安鐵洙.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2012(08)
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博士論文
[1]卵泡抑素影響牛胚胎早期發(fā)育的研究[D]. 郭鎮(zhèn)華.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3316768