“Dolly”誕生以來，體細(xì)胞核移植技術(shù)得到了快速的發(fā)展，各種克隆動(dòng)物相繼誕生。但是，體細(xì)胞核移植胚胎體外發(fā)育率低，受孕率低，流產(chǎn)率高及克隆動(dòng)物出生后異常成為制約這項(xiàng)技術(shù)廣泛應(yīng)用的瓶頸。目前研究認(rèn)為體細(xì)胞核在卵母細(xì)胞質(zhì)中不完全的表觀遺傳重編程是引起克隆胚胎及克隆動(dòng)物發(fā)育異常，核移植效率低下的重要原因。為了進(jìn)一步研究胚胎早期發(fā)育過程中的表觀遺傳重編程機(jī)制，提高核移植效率，本研究對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟過程，體外受精胚胎和體細(xì)胞核移植胚胎早期發(fā)育過程中幾個(gè)重要的表觀遺傳修飾位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，較系統(tǒng)地研究了牛卵母細(xì)胞體外成熟和胚胎早期發(fā)育過程中表觀遺傳修飾的變化，并比較了牛體細(xì)胞核移植胚胎和體外受精胚胎早期發(fā)育過程中表觀遺傳修飾的差異；研究了不同的組蛋白去乙酰化酶抑制劑對(duì)牛體細(xì)胞核移植胚胎體外發(fā)育能力和表觀遺傳重編程的影響；建立了牛卵母細(xì)胞Cell-Free體系，并利用該體系對(duì)體細(xì)胞重編程因子進(jìn)行了初步篩選。主要的研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：1.采用免疫熒光染色技術(shù)，對(duì)牛卵母細(xì)胞體外成熟過程，體外受精胚胎和體細(xì)胞核移植胚胎早期發(fā)育過程中幾個(gè)重要的表觀遺傳修飾位點(diǎn)（5-mec， H3K9ac，H4K8ac，H... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

牛卵母細(xì)胞成熟過程中（GV期，MI期，MII期）表觀遺傳修飾（5-mec，H3K9ac，H4K8ac，H3K9m2，H3K9m3）的變化

圖 3-2 牛體外受精胚胎和核移植胚胎早期發(fā)育過程中 DNA 甲基化（5-mec）水平的變化。（A）牛體外受精胚胎和核移植胚胎在 2-細(xì)胞，4-細(xì)胞，8-細(xì)胞，桑椹胚和囊胚期 DNA 甲基化染色（綠色）和PI 染核（紅色），200 倍放大。（B）體外受精胚胎和核移植胚胎早期發(fā)育過程中 DNA 甲基化免疫熒光強(qiáng)度的對(duì)比。（C）體外受精胚胎和核移植胚胎早期發(fā)育過程中 DNA 甲基化免疫熒光強(qiáng)度的變化。平均光密度強(qiáng)度使用 Image-Pro Plus 6.0 軟件檢測(cè)。同一組內(nèi)不同的上標(biāo)（a,b）代表差異顯著（P<0.05）。Fig 3-2 Patterns of 5-mec in early development of IVF and SCNT embryos. (A) Staining of 5-mec in 2-cell,4-cell, 8-cell, morula and blastocyst stages of IVF and SCNT embryos (green). Each sample wascounterstained with PI to visualize DNA (red). Original magnification was ×200. (B) The comparison ofrelative fluorescence intensity of DNA methylation in early development of IVF and SCNT embryos. (C)The dynamic changes of relative fluorescence intensity of DNA methylation in early development of IVFand SCNT embryos. Average opitical intensity was measured using Image-Pro Plus 6.0 software. Valueswith different superscripts (a, b) within groups are significantly different (P<0.05).30

圖 3-3 牛體外受精胚胎和核移植胚胎早期發(fā)育過程中 H3K9ac 水平的變化。（A）牛體外受精胚胎和核移植胚胎在 2-細(xì)胞，4-細(xì)胞，8-細(xì)胞，桑椹胚和囊胚期 H3K9ac 染色（綠色）和 DAPI 染核（藍(lán)色），200 倍放大。（B）體外受精胚胎和核移植胚胎早期發(fā)育過程中 H3K9ac 免疫熒光強(qiáng)度的對(duì)比。（C）體外受精胚胎和核移植胚胎早期發(fā)育過程中 H3K9ac 免疫熒光強(qiáng)度的變化。平均光密度強(qiáng)度使用Image-Pro Plus 6.0 軟件檢測(cè)。同一組內(nèi)不同的上標(biāo)（a,b）代表差異顯著（P<0.05）。Fig 3-3 Patterns of H3K9ac in early development of IVF and SCNT embryos. (A) Staining of H3K9ac in2-cell, 4-cell, 8-cell, morula and blastocyst stages of IVF and SCNT embryos (green). Each sample wascounterstained with DAPI to visualize DNA (blue). Original magnification was ×200. (B) The comparisonof relative fluorescence intensity of H3K9ac in early development of IVF and SCNT embryos. (C) Thedynamic changes of relative fluorescence intensity of H3K9ac in early development of IVF and SCNTembryos. Average opitical intensity was measured using Image-Pro Plus 6.0 software. Values with differentsuperscripts (a, b) within groups are significantly different (P<0.05).31

【參考文獻(xiàn)】：
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