發(fā)布時間：2021-07-27 20:49

　　旨在建立綿羊附睪上皮永生化細胞系,為進一步研究綿羊附睪功能調節(jié)機制提供基礎。本研究采用酶消化法分離培養(yǎng)原代綿羊附睪上皮細胞,利用脂質體將pCI-neo-hTERT質粒轉入綿羊附睪上皮細胞（SEECs）,經G418篩選得到了細胞系hTERT-SEECs,免疫熒光法鑒定其角蛋白18（CK18）和人端粒酶逆轉錄亞基（hTERT）表達情況;RT-PCR檢測其hTERT mRNA的表達;采用CCK-8法繪制細胞生長曲線檢測其增殖能力;利用流式細胞儀檢測其周期和細胞凋亡情況;核型分析檢測其倍體情況;從mRNA和蛋白水平檢測其谷胱甘肽過氧化物酶5（GPX5）和雄激素受體（AR）的表達情況。結果顯示,原代綿羊附睪上皮細胞呈典型的鋪路石狀形態(tài)。hTERT成功轉入綿羊附睪上皮細胞,傳45代后,hTERT-SEECs仍呈鋪路石狀;hTERT-SEECs仍可穩(wěn)定表達CK18和hTERT,并且擁有正常的二倍體核型;hTERT-SEECs增殖能力高于原代細胞,hTERT-SEECs處于G1期的細胞比例顯著低于SEECs（P<0.05）,處于S期細胞比例顯著高于SEECs（P<0.05）,且其活細胞率顯... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學報. 2019,50(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

圖５ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ中的ｈＴＥＲＴ蛋白免疫熒光檢測（４００×）Ｆｉｇ．５ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｈＴＥＲＴｉｎｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ（４００×）

畜牧獸醫(yī)學報５０卷圖５ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ中的ｈＴＥＲＴ蛋白免疫熒光檢測（４００×）Ｆｉｇ．５ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｈＴＥＲＴｉｎｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ（４００×）Ａ．染色體排列圖；Ｂ．ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ核型圖Ａ．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ；Ｂ．ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓｋａｒｙｏｔｙｐｅ圖６ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ核型分析（４００×）Ｆｉｇ．６ＫａｒｙｏｔｙｐｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ（４００×）圖７ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ和ＳＥＥＣｓ生長曲線Ｆｉｇ．７ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓａｎｄＳＥＥＣｓｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｓ化特性非常重要，任何細胞生長特性的變化都會對后續(xù)的試驗結果產生顯著影響［２５］。ｈＴＥＲＴ的ＲＴ－ＰＣＲ和免疫熒光染色結果顯示，ｈＴＥＲＴ已成功轉入細胞，并且在基因組中穩(wěn)定表達。ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ角蛋白１８染色仍呈陽性，表明該細胞系有正常上皮細胞的表型特征。增殖活力是永生化細胞系最重要的特性之一。轉染前后細胞增殖曲線形態(tài)均近似“Ｓ”型，ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ具有更高的生長速率。使用流式細胞儀進行細胞周期和細胞凋亡分析，結果顯示，與ＳＥＥＣｓ相比，ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ處于Ｓ期的細胞比例、活細胞率均顯著升高（Ｐ＜０．０５），處于Ｇ１期的細胞比例、凋亡率均顯著降低（Ｐ＜０．０５）。綜上所述，本研究所建立的ｈＴＥＲＴ－ＳＥＥＣｓ具有８２８１

【參考文獻】：
期刊論文
[1]附睪小體功能蛋白及sRNA研究進展[J]. 肖娟,王訊,羅毅,李曉開,李學偉.  遺傳. 2018(03)
[2]絨山羊附睪上皮細胞培養(yǎng)方法的建立及其生長特性[J]. 范曉梅,張通,栗瑞蘭,邊小娜,張家新.  畜牧獸醫(yī)學報. 2017(07)
[3]永生化山羊子宮內膜上皮細胞系的建立及其生物學特性[J]. 吳慶俠,董海龍,劉忠艷,朱洪云.  中國農業(yè)大學學報. 2017(02)
[4]人類輸卵管上皮永生化細胞系的建立及鑒定[J]. 高雯,臧榮余,王雁,楊麗娜,劉楊,亓子豪,尹勝,楊恭.  中國癌癥雜志. 2013(04)
[5]山羊子宮內膜基質細胞永生化研究[J]. 盛宏霞,吳慶俠,靳亞平,秦新喜,董海龍.  畜牧獸醫(yī)學報. 2009(06)

博士論文
[1]牛乳腺上皮細胞永生化及其多能性的研究[D]. 李吉霞.西北農林科技大學 2010



本文編號：3306518