胚胎移植技術(shù)（Embryo transfer,ET）是胚胎工程的最后一個步驟,對胚胎的妊娠率起著關(guān)鍵性的作用。在小鼠、牛羊以及人類的胚胎移植過程中,常常會有一定量的空氣伴隨胚胎被移植進入子宮。這些氣泡是否影響胚胎移植的結(jié)果,至今沒有定論。研究表明在豚鼠、大鼠、倉鼠等嚙齒類動物中,體內(nèi)雌、孕激素水平在一定條件下,宮腔內(nèi)空氣能誘導子宮內(nèi)膜發(fā)生蛻膜化反應(yīng)。同時小鼠胚胎移植結(jié)果顯示,子宮內(nèi)氣泡能夠?qū)е略缙谂咛ニ劳�。蛻膜化能否正常進行是胚胎著床發(fā)育的關(guān)鍵因素。因此為了探究子宮內(nèi)氣泡對胚胎發(fā)育的影響,我們向假孕3.5d、正常妊娠3.5d小鼠子宮角內(nèi)移植微量空氣,收集7.5d蛻膜組織,通過形態(tài)觀察、子宮內(nèi)膜通透性檢驗、組織切片、蛋白質(zhì)雙向電泳、轉(zhuǎn)錄組測序及RT-PCR驗證的實驗方法對其機理進行研究。結(jié)果顯示子宮內(nèi)氣泡能夠誘導小鼠子宮角發(fā)生明顯的增粗、增重、體積增大,且發(fā)生明顯的血管重塑,雙核細胞大量出現(xiàn),各類細胞不規(guī)則分布,不能夠區(qū)分主、次蛻膜區(qū),子宮內(nèi)胚胎大量死亡。蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果顯示在被檢測范圍內(nèi),子宮內(nèi)氣泡誘導蛻膜與正常蛻膜無蛋白差異點。而轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果顯示,兩組之間有64個差異表達基因,其... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學河北省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

注射空氣后子宮內(nèi)膜毛細血管通透性增強A為正常妊娠小鼠子宮內(nèi)膜通透性檢測結(jié)果，可見清晰離散的藍色條帶；B為空氣處理后小鼠子宮內(nèi)膜通透性檢測結(jié)果，實驗側(cè)整個子

control side.于假孕7.5d取其子宮，發(fā)現(xiàn)注射空氣側(cè)子宮角發(fā)生了明顯的增粗增重，體積增大并出現(xiàn)明顯的結(jié)節(jié)，但結(jié)節(jié)不小不均勻，如圖3-2所示，注射空氣側(cè)（實驗側(cè)）子宮角直徑、重量與對照側(cè)相比差異顯著（P<0.05），如表3-1所示。圖3-2 注射空氣側(cè)子宮角發(fā)生明顯的增粗實驗側(cè)發(fā)生明顯增粗，體積增大，對照側(cè)無變化Fig.3-2 Obvious thickening of uterine horn on the side of air injectedThe experimental side was thickened and the volume increased, but the control side did not change

表中*表示差異顯著*means the difference is significant at the 0.05 level組織切片結(jié)果顯示，與對照側(cè)子宮角相比，如圖3-3A所示，實驗側(cè)子宮內(nèi)膜上皮細胞發(fā)生明顯的增生現(xiàn)象，同時發(fā)現(xiàn)大量雙核細胞，如圖3-3B箭頭所示。增生組織致密，有明顯的血管重塑現(xiàn)象，血管分布不規(guī)則，重塑血管包裹的區(qū)域類似正常蛻膜中胎兒著床位點。圖3-3 子宮組織HE染色A為正常子宮的組織切片；B為假孕誘導產(chǎn)生蛻膜的組織切片，發(fā)生明顯的增生，并有多核化細胞出現(xiàn)（箭頭所示）Fig.3-3 Histological images of uterusA is tissue section of normal uterus; B is tissue section of induced decidual tissue sections of pseudopregnancy, We found that it occurs obvioushyperplasia, and a number of polykaryocyte cells (arrow)為進一步確定子宮內(nèi)移植氣泡能否誘導子宮內(nèi)膜發(fā)生蛻膜化反應(yīng)，使用RT-PCR技術(shù)檢測空氣誘導增生組織與正常蛻膜組織中Cox-2，Prl3c1, Prl8a2的表達水平，結(jié)果顯示

【參考文獻】：
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本文編號：3305576