發(fā)布時(shí)間：2021-07-27 09:56

　　補(bǔ)體系統(tǒng)是構(gòu)成宿主第一道免疫防線的先天性免疫的重要組成部分,并在先天性免疫與獲得性免疫之間起著橋梁作用。補(bǔ)體系統(tǒng)可以快速識(shí)別和清除病原微生物,然而,病原微生物也進(jìn)化出多種機(jī)制逃避補(bǔ)體系統(tǒng)的攻擊。豬鏈球菌2型（Streptococcus suis serotype 2, SS2）是一種重要的人獸共患病原菌,嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)和人類(lèi)健康。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究發(fā)現(xiàn),SS2的表面蛋白SntA是一種血紅素結(jié)合蛋白,也是SS2的毒力因子之一,它可以與豬的補(bǔ)體分子C1qA相互作用。本文進(jìn)一步研究了SntA與C1qA相互作用對(duì)補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑的影響,取得如下主要結(jié)果：SntA與豬IgG競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合C1qA：分別表達(dá)純化SntA和豬C1qA蛋白,將C1qA蛋白包被ELISA板,加入豬IgG和/或SntA,洗滌后加入HRP標(biāo)記的羊抗豬IgG并顯色,用BSA代替SntA作對(duì)照。結(jié)果顯示,SntA蛋白能夠與豬IgG競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合C1qA蛋白,且隨著SntA蛋白濃度的升高,對(duì)豬IgG結(jié)合C1qA的抑制率也升高,當(dāng)SntA蛋白濃度到達(dá)4.9mg/ML時(shí),抑制率達(dá)到99.55%。說(shuō)明SntA蛋白能與豬IgG競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合C1 qA... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表(Abbreviation)
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 補(bǔ)體系統(tǒng)
        1.1.1 補(bǔ)體系統(tǒng)的概述
        1.1.2 補(bǔ)體的激活
        1.1.3 補(bǔ)體的調(diào)節(jié)
            1.1.3.1 FH家族
            1.1.3.2 膜結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白
            1.1.3.3 其它液態(tài)調(diào)節(jié)蛋白
    1.2 病原微生物(病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng))的補(bǔ)體逃逸
    1.3 豬鏈球菌概述
        1.3.1 豬鏈球菌病原學(xué)
        1.3.2 豬鏈球菌流行病學(xué)
        1.3.3 豬鏈球菌的危害
    1.4 豬鏈球菌2型表面蛋白SntA
2. 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        3.1.2 菌株與質(zhì)粒
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 培養(yǎng)基、抗生素及其他試劑的配制
    3.2 方法
        3.2.1 RNA的提取
            3.2.1.2 豬cDNA的獲得
            3.2.1.3 豬c1qA基因的獲得及質(zhì)粒pQE32的制備
            3.2.1.4 酶切與回收
            3.2.1.5 連接及轉(zhuǎn)化
            3.2.1.6 重組質(zhì)粒的酶切鑒定及測(cè)序驗(yàn)證
        3.2.2 蛋白質(zhì)的表達(dá)與純化
        3.2.3 BCA法測(cè)蛋白濃度
        3.2.4 SntA對(duì)IgG-C1qA結(jié)合的影響
        3.2.5 抗原-抗體復(fù)合物的制備
        3.2.6 SntA對(duì)C1q-抗原抗體復(fù)合物互作的影響
        3.2.7 SntA對(duì)C3沉積的影響
        3.2.8 Heme在SntA抑制補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑中的作用
4 結(jié)果與分析
    4.1 豬C1qA基因的RT-PCR擴(kuò)增
    4.2 豬C1qA基因的克隆與序列分析
    4.3 SntA和C1qA的表達(dá)及純化
    4.4 SntA與豬IgG競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合C1qA
    4.5 抗原抗體復(fù)合物的制備
    4.6 SntA抑制C1q與抗原抗體復(fù)合物的結(jié)合
    4.7 SntA抑制C3的生成
    4.8 Heme不直接介導(dǎo)SntA抑制補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑
5 討論
    5.1 SntA競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合C1qA
    5.2 SntA抑制C1qA結(jié)合到抗原抗體復(fù)合物
    5.3 補(bǔ)體經(jīng)典途徑激活過(guò)程中的問(wèn)題
    5.4 Heme在補(bǔ)體經(jīng)典途徑中的作用
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬鏈球菌病[J]. 耿艷紅,徐軍,王兆山,李桂芹.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2005(09)
[2]補(bǔ)體系統(tǒng) （文獻(xiàn)綜述）[J]. 朱錫華.  國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè)). 1979(02)



本文編號(hào)：3305561