補體系統(tǒng)是構(gòu)成宿主第一道免疫防線的先天性免疫的重要組成部分,并在先天性免疫與獲得性免疫之間起著橋梁作用。補體系統(tǒng)可以快速識別和清除病原微生物,然而,病原微生物也進化出多種機制逃避補體系統(tǒng)的攻擊。豬鏈球菌2型（Streptococcus suis serotype 2, SS2）是一種重要的人獸共患病原菌,嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)和人類健康。本實驗室的前期研究發(fā)現(xiàn),SS2的表面蛋白SntA是一種血紅素結(jié)合蛋白,也是SS2的毒力因子之一,它可以與豬的補體分子C1qA相互作用。本文進一步研究了SntA與C1qA相互作用對補體經(jīng)典激活途徑的影響,取得如下主要結(jié)果：SntA與豬IgG競爭性結(jié)合C1qA：分別表達純化SntA和豬C1qA蛋白,將C1qA蛋白包被ELISA板,加入豬IgG和/或SntA,洗滌后加入HRP標記的羊抗豬IgG并顯色,用BSA代替SntA作對照。結(jié)果顯示,SntA蛋白能夠與豬IgG競爭性結(jié)合C1qA蛋白,且隨著SntA蛋白濃度的升高,對豬IgG結(jié)合C1qA的抑制率也升高,當SntA蛋白濃度到達4.9mg/ML時,抑制率達到99.55%。說明SntA蛋白能與豬IgG競爭性結(jié)合C1 qA... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表(Abbreviation)
1 文獻綜述
    1.1 補體系統(tǒng)
        1.1.1 補體系統(tǒng)的概述
        1.1.2 補體的激活
        1.1.3 補體的調(diào)節(jié)
            1.1.3.1 FH家族
            1.1.3.2 膜結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白
            1.1.3.3 其它液態(tài)調(diào)節(jié)蛋白
    1.2 病原微生物(病毒、細菌、寄生蟲)的補體逃逸
    1.3 豬鏈球菌概述
        1.3.1 豬鏈球菌病原學(xué)
        1.3.2 豬鏈球菌流行病學(xué)
        1.3.3 豬鏈球菌的危害
    1.4 豬鏈球菌2型表面蛋白SntA
2. 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 引物設(shè)計與合成
        3.1.2 菌株與質(zhì)粒
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 培養(yǎng)基、抗生素及其他試劑的配制
    3.2 方法
        3.2.1 RNA的提取
            3.2.1.2 豬cDNA的獲得
            3.2.1.3 豬c1qA基因的獲得及質(zhì)粒pQE32的制備
            3.2.1.4 酶切與回收
            3.2.1.5 連接及轉(zhuǎn)化
            3.2.1.6 重組質(zhì)粒的酶切鑒定及測序驗證
        3.2.2 蛋白質(zhì)的表達與純化
        3.2.3 BCA法測蛋白濃度
        3.2.4 SntA對IgG-C1qA結(jié)合的影響
        3.2.5 抗原-抗體復(fù)合物的制備
        3.2.6 SntA對C1q-抗原抗體復(fù)合物互作的影響
        3.2.7 SntA對C3沉積的影響
        3.2.8 Heme在SntA抑制補體經(jīng)典激活途徑中的作用
4 結(jié)果與分析
    4.1 豬C1qA基因的RT-PCR擴增
    4.2 豬C1qA基因的克隆與序列分析
    4.3 SntA和C1qA的表達及純化
    4.4 SntA與豬IgG競爭性結(jié)合C1qA
    4.5 抗原抗體復(fù)合物的制備
    4.6 SntA抑制C1q與抗原抗體復(fù)合物的結(jié)合
    4.7 SntA抑制C3的生成
    4.8 Heme不直接介導(dǎo)SntA抑制補體經(jīng)典激活途徑
5 討論
    5.1 SntA競爭性結(jié)合C1qA
    5.2 SntA抑制C1qA結(jié)合到抗原抗體復(fù)合物
    5.3 補體經(jīng)典途徑激活過程中的問題
    5.4 Heme在補體經(jīng)典途徑中的作用
結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]豬鏈球菌病[J]. 耿艷紅,徐軍,王兆山,李桂芹.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2005(09)
[2]補體系統(tǒng) （文獻綜述）[J]. 朱錫華.  國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊). 1979(02)



本文編號：3305561