牛呼吸道合胞體病毒是引起犢牛呼吸道疾病的一個重要的致病原,屬于副粘病毒科，肺炎病毒屬。BRSV感染率相當高，但是死亡率低。然而隨著集約化養(yǎng)殖，BRSV引起牛的呼吸道疾病而導致死亡率增加。本病一般冬季多發(fā)，主要感染犢牛。由于我國尚未將BRSV列入檢疫范圍，有可能從有該病國家引進帶毒的牛，導致BRSV在我國的傳播。及時開展BRSV的研究對于防控該病有重要意義。利用牛呼吸道合胞體病毒（BRSV）接種牛肺細胞（BL），提取病毒RNA。通過RT-PCR擴增BRSV的核蛋白基因，然后定向克隆到原核表達載體pET30a，獲得重組表達質粒pET30a-N。將重組質粒轉化表達菌BL21（DE3），經增菌培養(yǎng)和IPTG誘導以及SDS-PAGE和Western blot分析，成功表達出了核蛋白（N），其分子量約為49kD。為制備BRSV核蛋白的單克隆抗體，用純化的重組核蛋白免疫BALB/c小鼠，取免疫鼠脾細胞與SP2/0細胞融合。采用以BRSV為檢測抗原的間接ELISA篩選陽性細胞克隆，經3次克隆純化后獲得2株穩(wěn)定分泌抗N特異性MAb的雜交瘤細胞株，分別命名為2D12與4B10。用2D12與4B10雜交瘤細... 

【文章來源】：中國農業(yè)科學院北京市

【文章頁數】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

BRSV的模式圖

圖 2-1 目的片段的擴增Fig2-1 The product of RT-PCRM：DNAMarker 1：The product of RT-PCR30a-N 經限制性內切酶消化后可見兩條帶，)。達與檢測-N 轉化的表達菌 BL21(DE3)經增菌培養(yǎng)后波處理后高速離心，取沉淀和上清分別進行 49kD，并且是以包涵體形式存在(圖 2-2)。

圖 2-1 目的片段的擴增Fig2-1 The product of RT-PCRM：DNAMarker 1：The product of RT-質粒 pET30a-N 經限制性內切酶消化后可見兩條帶(圖略)。白的表達與檢測 pET30a-N 轉化的表達菌 BL21(DE3)經增菌培養(yǎng)心和超聲波處理后高速離心，取沉淀和上清分別子量約為 49kD，并且是以包涵體形式存在(圖 2

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]牛呼吸道合胞體病毒RT-PCR檢測方法的建立[J]. 王紅,樸范澤,侯喜林.  動物醫(yī)學進展. 2008(11)
[4]牛呼吸道合胞體病毒的病原學與診治[J]. 王麗榮.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2006(06)



本文編號：3304082