發(fā)布時間：2021-07-26 18:48

　　旋毛蟲病是由于人類攝入含有旋毛蟲的肉類而感染的危害嚴重的人獸共患病,該病不僅對人和動物的身體健康產(chǎn)生巨大的傷害,同時對畜牧養(yǎng)殖和肉類進出口也造成了極大的經(jīng)濟損失。基于旋毛蟲肌幼蟲ES抗原建立的ELISA檢測方法是世界動物衛(wèi)生組織推薦使用的血清學檢測方法,但ES抗原制備困難。因此,研究出一種制備工藝便捷、特異性和靈敏度高的旋毛蟲病檢測方法,對保障社會的公共衛(wèi)生安全、維護肉類進出口貿(mào)易的穩(wěn)定、減少畜牧業(yè)的損失有著重要意義。絲氨酸蛋白酶抑制因子（Serine proteinase inhibitor,Serpin）是一類結(jié)構(gòu)相對保守的蛋白質(zhì)超家族,它能抑制絲氨酸蛋白酶在凝血、補體激活和炎癥中的功能,且在多種生物系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的生理作用。目前,已有研究證實絲氨酸蛋白酶抑制因子在旋毛蟲發(fā)育的各個階段均有轉(zhuǎn)錄表達,但是以絲氨酸蛋白酶抑制因子WM5作為檢測抗原,建立豬旋毛蟲感染的診斷方法卻沒有系統(tǒng)的報道。首先,本實驗室前期通過免疫學方法對旋毛蟲肌幼蟲時期的cDNA表達文庫進行篩選時,發(fā)現(xiàn)了高豐度且具有強反應(yīng)原性的絲氨酸蛋白酶抑制因子WM5抗原。本研究利用已構(gòu)建好的WM5原核表達系統(tǒng)誘導表達WM5重... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

WM5重組蛋白的表達與可溶性分析

第二篇研究內(nèi)容第一章WM5重組蛋白的表達純化及多克隆抗體的制備20solubilityanalysis.M:ProteinMarker;5:inclusionbody;6:supernatant1.3.1.2WM5重組蛋白的純化用AKTApurifier100系統(tǒng)對洗滌后的包涵體進行純化，并用不同濃度的咪唑進行洗脫，SDS-PAGE結(jié)果表明咪唑濃度為300mmol/L時洗脫的蛋白濃度較高，且洗脫較為完全（圖1.2A）。回收得到的蛋白經(jīng)SDS-PAGE鑒定，在37kDa處有單一條帶（圖1.2B），利用BCA法測定回收蛋白的濃度為2.8mg/mL。圖1.2WM5重組蛋白的SDS-PAGE鑒定A：不同濃度的咪唑洗脫回收蛋白的SDS-PAGE結(jié)果M：蛋白分子量標準；1：WM5包涵體；2：30mmol/L咪唑洗脫回收蛋白；3：50mmol/L咪唑洗脫回收蛋白；4：100mmol/L咪唑洗脫回收蛋白；5：300mmol/L咪唑洗脫回收蛋白；6：500mmol/L咪唑洗脫回收蛋白B：純化后WM5重組蛋白SDS-PAGEM：蛋白分子量標準；7：純化后WM5重組蛋白Fig.1.2SDS-PAGEidentificationofrecombinantWM5proteinA:SDS-PAGEofproteincollectedatdifferentimidazoleconcentration.M:ProteinMarker;1:inclusionbody;2:proteinrecoveredat30mmol/Limidazole;3:proteinrecoveredat50mmol/Limidazole;4:proteinrecoveredat100mmol/Limidazole;5:proteinrecoveredat300mmol/Limidazole;6:proteinrecoveredat500mmol/LimidazoleB:SDS-PAGEofpenetrativeandpurifiedrecombinantWM5protein.M:ProteinMarker;7:recombinantWM5afterpurification1.3.2WM5重組蛋白抗原性分析將WM5重組蛋白與感染劑量為1000條/只的豬陽性血清進行反應(yīng)，Westernblot結(jié)果如圖1.3所示，豬旋毛蟲感染的陽性血清可以特異性地識別WM5重組蛋白，表明WM5重組蛋白具有較強的免疫反應(yīng)性，進而可作為檢測豬旋毛蟲感染的候選抗原。圖1.3WM5重組蛋白的W

dat50mmol/Limidazole;4:proteinrecoveredat100mmol/Limidazole;5:proteinrecoveredat300mmol/Limidazole;6:proteinrecoveredat500mmol/LimidazoleB:SDS-PAGEofpenetrativeandpurifiedrecombinantWM5protein.M:ProteinMarker;7:recombinantWM5afterpurification1.3.2WM5重組蛋白抗原性分析將WM5重組蛋白與感染劑量為1000條/只的豬陽性血清進行反應(yīng)，Westernblot結(jié)果如圖1.3所示，豬旋毛蟲感染的陽性血清可以特異性地識別WM5重組蛋白，表明WM5重組蛋白具有較強的免疫反應(yīng)性，進而可作為檢測豬旋毛蟲感染的候選抗原。圖1.3WM5重組蛋白的Westernblot分析

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[3]旋毛蟲不同發(fā)育時期抗原基因的篩選與鑒定[D]. 吳秀萍.吉林大學 2009
[4]高質(zhì)量基因重組蛋白在屠宰動物旋毛蟲病診斷中的應(yīng)用[D]. 于申業(yè).吉林大學 2009

碩士論文
[1]旋毛蟲病熒光免疫層析抗體檢測試紙條的建立[D]. 張小波.吉林大學 2018
[2]旋毛蟲病ELISA和PCR診斷方法的建立[D]. 路麗群.東北農(nóng)業(yè)大學 2018
[3]旋毛蟲排泄分泌物抗原在鼠和豬免疫學診斷中的應(yīng)用研究[D]. 孫召金.吉林大學 2015
[4]旋毛蟲P53ES基因重組蛋白單克隆抗體的制備和鑒定[D]. 雷帥.東北農(nóng)業(yè)大學 2009



本文編號：3304145