玉米赤霉烯酮（ZEA）是由鐮)刀菌產(chǎn)生的一種具有雌激素樣作用的毒素,廣泛存在于世界各地的谷類糧食中。研究表明,ZEA結(jié)構(gòu)與17p-雌二醇相似,可拮抗雌激素與受體的結(jié)合和調(diào)節(jié),影響促性腺激素釋放激素（GnRH）的分泌,導(dǎo)致動(dòng)物及人類生殖能力的下降。近年來,ZEA可導(dǎo)致雄性動(dòng)物生殖功能障礙的現(xiàn)象受到人們的關(guān)注,但相關(guān)機(jī)制不明。為探明ZEA雄性生殖毒性的機(jī)理,本試驗(yàn)以分離大鼠原代睪丸支持細(xì)胞為材料,對(duì)ZEA在體外誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞Fas介導(dǎo)的凋亡進(jìn)行了研究。1.ZEA對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞Fas/FasL凋亡信號(hào)通路的影響為探究ZEA對(duì)睪丸支持細(xì)胞Fas/FasL凋亡信號(hào)通路的影響,采用大鼠原代睪丸支持細(xì)胞為材料,用不同濃度ZEA（0、5、10、20μmol/L）處理細(xì)胞24h,AnnexinV-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率;Western blot及qRT-PCR檢測(cè)死亡受體通路Fas/FasL相關(guān)蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄情況。用20μmol/LZEA處理細(xì)胞,于不同染毒時(shí)間（0、4、8、16h）使用Westernblot檢測(cè)凋亡調(diào)控蛋白Fas、FasL、FADD、cleaved-caspa... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１－１?ＺＥＡ對(duì)睪丸支持細(xì)胞凋亡水平??

圖２－１－３不同濃度ＺＥＡ對(duì)睪丸支持細(xì)胞Ｆａｓ／ＦａｓＬ通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響??３?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＺＥＡ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｄｏｅｓ?ｏｎ?ｒｅｌａｔｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｆａｓ／ＦａｓＬ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?ｉｎ?ＳｅｒｔｏＡ不同染毒時(shí)間對(duì)睪丸支持細(xì)胞Ｆａｓ／ＦａｓＬ通路中蛋白表達(dá)水平的處理睪丸支持細(xì)胞不同時(shí)間（０、４、８、１６ｈ），米用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法檢測(cè)Ｆａ通路中Ｆａｓ、ＦａｓＬ、ＦＡＤＤ、ｃｌｅａｖｅｄ?ｃａｓｐａｓｅ－８蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果如圖相比，各染毒組（４、８、１６ｈ）處理細(xì)胞中Ｆａｓ、ＦａｓＬ、ＦＡＤＤ、ｃｌｅａｖｅｄｃａ著或極顯著升高（Ｐ＜０．０５．Ｐ＜０．０１）。說明ＺＥＡ在不同時(shí)間能誘導(dǎo)睪丸支持路中標(biāo)志性蛋白Ｆａｓ、ＦａｓＬ、ＦＡＤＤ、ｃｌｅａｖｅｄ?ｃａｓｐａｓｅ－８蛋白表達(dá)上升。??

圖２－１－４不同時(shí)間ＺＥＡ對(duì)睪丸支持細(xì)胞Ｆａｓ／ＦａｓＬ通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響??－１－４?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＺＥＡ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅ?ｏｎ?ｒｅｌａｔｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｆａｓ／ＦａｓＬ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?ｉｎ?Ｓｅｒｔｏｌ論??雙等研宄發(fā)現(xiàn)，大鼠腹腔注射不同濃度ＺＥＡ后，血清睪酮和雌激素濃度增加明顯下降。細(xì)胞凋亡是由一系列膜受體和胞漿蛋白執(zhí)行的細(xì)胞主動(dòng)性自物生殖細(xì)胞凋亡的機(jī)制是受多基因控制，主要由Ｂｄ－２家族、ｃａｓｐａｓｅ家族等［ｍ］等研宄發(fā)現(xiàn)，不同濃度ＺＥＡ作用睪丸間質(zhì)細(xì)胞２４?ｈ后可誘導(dǎo)其凋亡。ｅｍａ［７１］等研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度ＺＥＡ作用于人的肝細(xì)胞后使線粒體功能喪失，ｓｐａｓｅ－３引起肝細(xì)胞的調(diào)亡。同時(shí)ＺＥＡ能夠通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，ｃａｓｐａｓｅ非依賴和體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡［７４］。本試驗(yàn)采用Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋同濃度ＺＥＡ作用于睪丸支持細(xì)胞，隨著染毒濃度的升高，凋亡率明顯上升，誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞的凋亡，從而使睪丸的生殖功能受到影響。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3303184