發(fā)布時間：2021-07-26 07:45

　　血竭素高氯酸鹽是從血竭中提取的血竭素通過成鹽后形成的一種穩(wěn)定物質(zhì)。本實驗通過體內(nèi)、外研究,探究血竭素高氯酸鹽在促進創(chuàng)傷修復(fù)過程中,對調(diào)控成纖維細(xì)胞增殖和相關(guān)蛋白表達的作用機制,為生肌類中藥血竭治療創(chuàng)傷修復(fù)提供一定的理論依據(jù)。在體外研究中,不同濃度的血竭素高氯酸鹽（0⁴0μg/mL）作用于NIH/3T3細(xì)胞24 h后,采用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞活性。確定三個有效濃度后,選取該濃度用于細(xì)胞劃痕實驗和流式細(xì)胞術(shù),檢測血竭素高氯酸鹽對細(xì)胞遷移和細(xì)胞周期的影響。確定最佳有效濃度后,檢測藥物干預(yù)后表皮生長因子受體（EGFR）、成纖維細(xì)胞生長因子受體（FGFR）、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）/環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）、應(yīng)激活化蛋白激酶（JNK）和胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）磷酸化水平的變化,并且使用抑制劑和基因封閉的方法進行反向驗證,最終確定血竭素高氯酸鹽促進細(xì)胞增殖的作用機制。在體內(nèi)研究中,將血竭素溶于凡士林制備膏劑,對大鼠背部皮膚進行機械打孔制備創(chuàng)傷模型后,實驗組大鼠創(chuàng)口涂抹血竭素藥膏。對照組大鼠創(chuàng)口... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

血竭素高氯酸鹽對成纖維細(xì)胞中ERK通路的影響（n=3,xSD）

(A) (B)注：**、△△、##和●●表示 p<0.01，差異極顯著。Note: **, △△, ## and ●● indicate that p<0.01, the difference is very significant.圖 3-6 血竭素高氯酸鹽對成纖維細(xì)胞中 MAPK 和 PI3K 通路的影響（n=3, x SD）Fig. 3-6 The effects of Dracorhodin Perchlorate on MAPK and PI3K signaling pathway infibroblast (n=3, x SD)3.7 相關(guān)通路抑制劑對血竭素高氯酸鹽誘導(dǎo)的通路激活的影響在本實驗中，主要使用了三種通路抑制劑（EGFR 抑制劑 AG1478，ERK 抑制劑 U0126，PI3K 抑制劑 LY294002），驗證血竭素高氯酸鹽誘導(dǎo)激活的相關(guān)通路之間的關(guān)系。如圖 3-7A和 3-7B 所示，成纖維細(xì)胞在 AG1478 的預(yù)處理前提下，血竭素高氯酸鹽將不再上調(diào) EGFR 磷酸化（p>0.05），在對下游通路的檢測中，發(fā)現(xiàn)在 EGFR 受到抑制時，血竭素高氯酸鹽誘導(dǎo)ERK 和 PI3K 通路的活化也受到了抑制（p>0.05）。如圖 3-8A 和 3-8B 所示同樣的實驗思路，成纖維細(xì)胞被 U0126 或 LY294002 預(yù)處理后，血竭素高氯酸鹽誘導(dǎo)的 EGFR 通路活化并未受到影響，相比于用藥前，EGFR 磷酸化水平仍有明顯的上調(diào)（p<0.01）。U0126 明顯抑制 ERK及其下游通路 CREB 活化（p<0.01），但是對 PI3K 通路沒有明顯影響（p>0.05）。如圖 3-9A和 3-9B 所示同理 LY294002 能夠抑制血竭素高氯酸鹽誘導(dǎo)的 PI3K 通路及其下游通路

(A) (B)注： **、△△、##和●●表示 p<0.01，差異極顯著。Note: **, △△, ## and ●● indicate that p<0.01, the difference is very significant.圖 3-7 AG1478 對血竭素高氯酸鹽誘導(dǎo)的相關(guān)蛋白通路激活的影響（n=3, x SD）Fig. 3-7 The effects of AG1478 on Dracorhodin Perchlorate-induced relative signaling pathactivation in fibroblast（n=3, x SD）

【參考文獻】：
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本文編號：3303145