牛病毒性腹瀉�。╞ovine viral diarrhea,BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）感染動(dòng)物機(jī)體引起的腹瀉、黏膜脫落、母牛繁殖障礙、呼吸道疾病等多癥狀、多宿主為特征的一種急性、熱性傳染病。牛病毒性腹瀉病毒是黃病毒科（Flaviviridae）瘟病毒屬（Pestivirus）的代表種,在世界范圍內(nèi)廣泛傳播。近年來,在我國新疆地區(qū)也呈現(xiàn)蔓延趨勢,嚴(yán)重影響了新疆養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展并造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此,本研究通過血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查和分子生物學(xué)流行病學(xué)調(diào)查,以期掌握本地區(qū)BVDV的流行情況以及毒株型,能夠?yàn)樵撘?guī)模牛場的防控和凈化提出策略和方案。1.2018年12月²019年3月對新疆南疆某規(guī)模牛場進(jìn)行全群采血,共采集2 358份血清樣本,進(jìn)行牛病毒性腹瀉病毒抗體ELISA檢測,結(jié)果有1 958份牛病毒性腹瀉病毒抗體陽性樣本,陽性率為83%（1 958/2 358）;其中成年牛陽性樣品1 875份,抗體陽性率為84.16%（1 875/2 228）,占總數(shù)的79.52%（1 875/2 358）,犢牛陽... 

【文章來源】：塔里木大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

BVDV5’-UTR基因RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第4章新疆南疆某規(guī)模牛場BVDV分子生物學(xué)檢測23行RT-PCR擴(kuò)增，凝膠成像，結(jié)果得到11條大小為292bp的片段，與預(yù)期片段大小相符（圖4-1）。0M123456M789101112泳道M：DNAmarkerD2000；泳道0：空白對照；泳道1-12：RT-PCR擴(kuò)增片段圖4-1BVDV5’-UTR基因RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.4-1BVDV5’-UTRgeneRT-PCRexpandsincreasetheresults4.3.2BVDVN基因擴(kuò)增結(jié)果以N基因特異性引物（BVDVB1/BVDVB2），進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，凝膠成像，結(jié)果得到4條大小為736bp的片段，與預(yù)期片段大小相符（圖4-2）。1M2345泳道M：DNAmarkerD2000；泳道1：空白對照；泳道2~5：RT-PCR擴(kuò)增片段圖4-2BVDVN基因RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.4-2BVDVNgeneRT-PCRexpandsincreasetheresults4.3.3PI牛RT-PCR鑒定經(jīng)過對第一次血清學(xué)抗原檢測的9份陽性血清牛進(jìn)行復(fù)檢，得到的1份陽性血清，以5’-UTR基因特異性引物（BVDVA1/BVDVA2）、N基因特異性引物（BVDVB1/BVDVB2）和5"-UTR+N基因特異性引物（BVDVA1/BVDVB2），進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，電泳成像，均擴(kuò)增出目的片段，片段大小為292bp、736bp以及1028bp，與預(yù)期片段大小2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp292bp736bp

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第4章新疆南疆某規(guī)模牛場BVDV分子生物學(xué)檢測24相符（圖4-3）。1M234圖4-3PI牛RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.4-3persistentinfectioncattleRT-PCRexpandsincreasetheresults4.4RT-PCR檢測結(jié)果4.4.1BVDV5’-UTR基因檢測結(jié)果以2019年1月ELISA檢測出的9份BVDV抗原陽性的血清和3份疑似陽性的血清作為樣本，共計(jì)12份，經(jīng)過檢測，得出11份BVDV核酸陽性樣品，即5T-2-1、5T-2-2、5T-2-3、5T-2-4、5T-2-6、5T-2-7、5T-2-8、5T-2-9、5T-2-10、5T-2-11、5T-2-12。4.4.2BVDVN基因檢測結(jié)果以同上12份血清作為樣本，經(jīng)過檢測，得出4份陽性結(jié)果，即5T-2-1、5T-2-4、5T-2-8、5T-2-9。4.4.3PI牛鑒定結(jié)果對復(fù)檢得到的1份陽性血清進(jìn)行5’-UTR基因、N基因和5"-UTR+N基因的RT-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增出的片段，與預(yù)期片段大小相同，證明為陽性牛。因血清學(xué)檢測結(jié)果為陽性，且為21d后的復(fù)檢，確定為PI牛。4.5同源性比較4.5.1BVDV5’-UTR核苷酸同源性比較將測序結(jié)果進(jìn)行同源性比較，結(jié)果如下圖（4-5）所示。檢測出的11份陽性樣品的2000bp1000bp750bp500bp250bp100bp1028bp736bp292bp

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[7]牛病毒性腹瀉病毒新疆流行株的分離鑒定及E2基因遺傳變異研究[D]. 王國超.石河子大學(xué) 2014
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[10]基因2型牛病毒性腹瀉病毒的分離、鑒定[D]. 任敏.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3297725