MDA5在IBDV感染雞胚成纖維細胞自噬發(fā)生過程中的作用研究
發(fā)布時間：2021-07-21 11:21
傳染性法氏囊病病毒（IBDV）是屬于Birnaviridae家族的雙鏈RNA病毒。自噬是真核細胞的死亡方式之一。有研究表明,IBDV可以引起DF-1細胞自噬,但其具體機制仍有待研究。MDA5為模式識別受體家族中的一員,能夠特異性識別雙鏈RNA病毒。課題組前期研究顯示,IBDV能夠激活雛雞法氏囊內(nèi)雞MDA5（chMDA5）信號通路,參與IBDV感染雛雞過程。因此,本試驗以IBDV為致病原,雞胚成纖維細胞（CEF）為研究對象,對MDA5與IBDV引起的自噬之間的關(guān)系進行研究,進一步揭示IBDV致病機制。首先,將雙鏈RNA病毒模擬物poly（I:C）轉(zhuǎn)染至CEF,采用Western blot方法對CEF內(nèi)chMDA5蛋白表達進行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)poly（I:C）轉(zhuǎn)染能夠引起CEF內(nèi)chMDA5的表達升高。之后將CEF分為對照組、poly（I:C）組、chMDA5 siRNA+poly（I:C）組、Rapa+poly（I:C）組、3-MA+poly（I:C）組,采用Western blot方法對細胞內(nèi)自噬標(biāo)志蛋白LC3表達進行檢測,結(jié)果顯示chMDA5介導(dǎo)poly（I:C）引起CEF的自噬,并且...
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
IBDV的PCR鑒定100bp
37注：a)：正常對照組；b)：IBDV 感染組；c)、d)：chMDA5 siRNA+IBDV 組。A：自噬體；M：線粒體；N：細胞核。Note: a): control group; b): IBDV infection group; c), d): chMDA5 siRNA+IBDV group.A: autophagosome;M: mitochondria; N: nucleus.圖 3-14 CEF 超微病理學(xué)變化Fig. 3-14 CEF ultramicropathological changes
-18T 載體連接后的產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化進行測序分析，經(jīng)軟件分析獲粒構(gòu)建成功。量 PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制粒 T-IBDV VP2 濃度為 273.4 n 6.1×1010（拷貝數(shù)/μL）。故×104、6.1×103、6.1×102，即反1.22×105、1.22×104。進行 PC反應(yīng)對應(yīng)的 Ct 值分別為 12.04，曲線中只有一個峰值，表明目圖 3-16 IBDV VP2 引物的鑒定6 Identification of IBDV VP2 pr
【參考文獻】：
期刊論文
[1]番鴨呼腸孤病毒感染誘導(dǎo)細胞自噬的研究[J]. 吳異健,崔龍萍,黃詩杭,王全溪,吳曉平,周五朵,朱二鵬,黃一帆,吳寶成. 病毒學(xué)報. 2017(02)
[2]自噬小體膜來源的形態(tài)學(xué)分析[J]. 王自彬,王靜,王玲,趙文娥. 電子顯微學(xué)報. 2016(06)
[3]傳染性法氏囊病病毒感染對雞細胞模式識別受體及抗病毒基因轉(zhuǎn)錄的影響[J]. 歐陽偉,王永山,王曉麗,夏興霞,潘群興,畢振威,諸玉梅,董晨紅,張海彬. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2015(02)
[4]MDA5在先天性免疫抗病毒作用中的研究進展[J]. 劉歡歡,謝麗君,邵志勇,高洪,嚴(yán)玉霖. 中國畜牧獸醫(yī). 2015(01)
[5]感染傳染性法氏囊病病毒的DF-1細胞中chTLR3表達的動態(tài)變化[J]. 王成成,王杲強,葛銘,于群,潘龍,張瑞莉. 中國獸醫(yī)科學(xué). 2014(12)
[6]細胞自噬與病毒感染[J]. 陶冶,任曉峰. 病毒學(xué)報. 2013(01)
[7]胞漿內(nèi)核酸受體RLRs的研究進展[J]. 廖倩,吳謖琦,孫修勤. 海洋科學(xué)進展. 2013(01)
[8]核因子-κB與眼科疾病的研究進展[J]. 袁洪峰,賀翔鴿. 國際眼科雜志. 2008(01)
碩士論文
[1]雞MDA5信號通路在IBDV致雛雞法氏囊病理損傷中的作用研究[D]. 欒亞男.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]雞TLR3信號通路在IBDV致雛雞法氏囊免疫損傷中的作用研究[D]. 趙霞.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]雞傳染性法氏囊病病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白的克隆與表達[D]. 朱彩霞.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
本文編號：3294929
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
IBDV的PCR鑒定100bp
37注：a)：正常對照組；b)：IBDV 感染組；c)、d)：chMDA5 siRNA+IBDV 組。A：自噬體；M：線粒體；N：細胞核。Note: a): control group; b): IBDV infection group; c), d): chMDA5 siRNA+IBDV group.A: autophagosome;M: mitochondria; N: nucleus.圖 3-14 CEF 超微病理學(xué)變化Fig. 3-14 CEF ultramicropathological changes
-18T 載體連接后的產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化進行測序分析，經(jīng)軟件分析獲粒構(gòu)建成功。量 PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制粒 T-IBDV VP2 濃度為 273.4 n 6.1×1010（拷貝數(shù)/μL）。故×104、6.1×103、6.1×102，即反1.22×105、1.22×104。進行 PC反應(yīng)對應(yīng)的 Ct 值分別為 12.04，曲線中只有一個峰值，表明目圖 3-16 IBDV VP2 引物的鑒定6 Identification of IBDV VP2 pr
【參考文獻】：
期刊論文
[1]番鴨呼腸孤病毒感染誘導(dǎo)細胞自噬的研究[J]. 吳異健,崔龍萍,黃詩杭,王全溪,吳曉平,周五朵,朱二鵬,黃一帆,吳寶成. 病毒學(xué)報. 2017(02)
[2]自噬小體膜來源的形態(tài)學(xué)分析[J]. 王自彬,王靜,王玲,趙文娥. 電子顯微學(xué)報. 2016(06)
[3]傳染性法氏囊病病毒感染對雞細胞模式識別受體及抗病毒基因轉(zhuǎn)錄的影響[J]. 歐陽偉,王永山,王曉麗,夏興霞,潘群興,畢振威,諸玉梅,董晨紅,張海彬. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2015(02)
[4]MDA5在先天性免疫抗病毒作用中的研究進展[J]. 劉歡歡,謝麗君,邵志勇,高洪,嚴(yán)玉霖. 中國畜牧獸醫(yī). 2015(01)
[5]感染傳染性法氏囊病病毒的DF-1細胞中chTLR3表達的動態(tài)變化[J]. 王成成,王杲強,葛銘,于群,潘龍,張瑞莉. 中國獸醫(yī)科學(xué). 2014(12)
[6]細胞自噬與病毒感染[J]. 陶冶,任曉峰. 病毒學(xué)報. 2013(01)
[7]胞漿內(nèi)核酸受體RLRs的研究進展[J]. 廖倩,吳謖琦,孫修勤. 海洋科學(xué)進展. 2013(01)
[8]核因子-κB與眼科疾病的研究進展[J]. 袁洪峰,賀翔鴿. 國際眼科雜志. 2008(01)
碩士論文
[1]雞MDA5信號通路在IBDV致雛雞法氏囊病理損傷中的作用研究[D]. 欒亞男.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]雞TLR3信號通路在IBDV致雛雞法氏囊免疫損傷中的作用研究[D]. 趙霞.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]雞傳染性法氏囊病病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白的克隆與表達[D]. 朱彩霞.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
本文編號：3294929
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