睪丸組織尤其是幼齡動物睪丸組織的冷凍保存技術(shù)不僅能為優(yōu)良家畜生殖細(xì)胞保存、珍稀瀕危物種保護(hù)等提供新的途徑，而且能為未成年男性癌癥患者生育能力恢復(fù)、組織器官冷凍保存等提供理論基礎(chǔ)，對動物方向生物繁殖技術(shù)的進(jìn)步有巨大的推動作用。為了探討犢牛睪丸組織適宜的冷凍保存技術(shù)體系，本研究設(shè)計了6種以甘油、DMSO、乙二醇、海藻糖、BSA和睪丸液為主要成份的冷凍保護(hù)液配伍，首先測定冷凍后犢牛睪丸組織中AKP、ACP、LDH和β-D-Glucosidase等標(biāo)志性酶活性，然后運用RT-PCR技術(shù)測定睪丸組織中CREM、Stra8、HSP70-2、Oct4、SCF和C-KIT6個基因的相對表達(dá)量，同時將解凍后的睪丸組織制備為單細(xì)胞懸液并測定細(xì)胞活率，并選擇活率最高的睪丸細(xì)胞進(jìn)行SSCs的分離純化培養(yǎng)，運用堿性磷酸酶染色和反轉(zhuǎn)錄PCR法對獲得的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。主要研究結(jié)果如下：1.經(jīng)15mg/ml牛血清白蛋白（BSA）冷凍7d后，睪丸組織AKP、ACP、LDH和β-D-Glucosidase的活性分別為599.99、129.11、1891.53和489.98U/gprot，均顯著高于其他組（P<0.05... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

精子發(fā)生過程

代代相傳的特性而被視為永生細(xì)胞（Ali Honaramooz 2003）。對于 SSCs 體外增誘導(dǎo)分化的研究可以為哺乳動物精子發(fā)生的相關(guān)研究提供理論基礎(chǔ)，也可以為雄種質(zhì)資源的保存提供技術(shù)支持，利用 SSCs 的信息遺傳特性將其作為基因載體來基因動物試驗?zāi)Ｐ驼诔蔀閲鴥?nèi)外轉(zhuǎn)基因領(lǐng)域的研究熱點。

的 5～7 倍；流式細(xì)胞分選術(shù)也是通過識別 SSCs 的特異未確定一種只在 SSCs 表面特異性表達(dá)的標(biāo)志物，所以Kanatsu-Shinohara et al. 2003a; Kubota et al. 2004a）；差易掌握，首先用無菌的明膠溶液包被培養(yǎng)皿，然后將制大約 12h，鑒于體細(xì)胞（如支持細(xì)胞）比精原細(xì)胞能夠器輕輕吹打培養(yǎng)液即可使剛貼壁或輕微貼壁的精原細(xì)胞中便可富集培養(yǎng)。定常用形態(tài)學(xué)、免疫組化染色和細(xì)胞特異性表達(dá)基因等al. 2004）。SSCs 的培養(yǎng)是進(jìn)行誘導(dǎo)分化和后續(xù)研究的基培養(yǎng)基、血清，特別是一些促生長因子如膠質(zhì)細(xì)胞源性纖維細(xì)胞促生長因子（bFGF）、白血病抑制因子（LIF現(xiàn) GDNF 是 SSCs 分化調(diào)控的關(guān)鍵因子；尹明和李德雪體外能夠促進(jìn) SSCs 的分化，LIF 對 SSCs 增殖具有明顯促發(fā)生過程中 SSCs 增殖分化的機理了解地尚不夠透徹，體系的建立仍然存在諸多困難，這需要我們繼續(xù)努力探

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]冷凍保護(hù)劑對豬精液的冷凍保護(hù)作用[J]. 王春偉,高璞,蘇澤智,李青旺,楊公社,胡建宏.  家畜生態(tài)學(xué)報. 2013(07)
[2]5種禽類卵黃低密度脂蛋白對豬精子冷凍效果的影響[J]. 呂瑞凱,胡建宏,王紅,程亮,江中良,李青旺,姚俊,張鵬飛.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2011(09)
[3]奶山羊睪丸組織冷凍保存及復(fù)蘇后精原干細(xì)胞的分離培養(yǎng)[J]. 朱海鯨,華進(jìn)聯(lián),宋文聰,黃建升,田澤華.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2011(04)
[4]牦牛睪丸組織能量代謝相關(guān)酶活力的分析[J]. 邱翔,林亞秋,王國生,阮武勇,劉薇,王翠麗,黃林,鄭玉才.  四川動物. 2010(05)
[5]MC004對大鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)和酶活力的影響[J]. 駱永偉,施暢,楊保華,胡中慧,吳純啟,王全軍,馬華智,周莉,廖明陽.  毒理學(xué)雜志. 2009(05)
[6]不同卵巢組織冷凍方法對保存女性生育力的研究[J]. 劉愛華,周平,魏兆蓮,章志國,邢瓊,曹云霞.  生殖醫(yī)學(xué)雜志. 2009 (04)
[7]基于生物新陳代謝中酶的高效催化性研究[J]. 李淑麗.  甘肅聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2009(04)
[8]Stra8:生殖細(xì)胞有絲分裂轉(zhuǎn)變?yōu)闇p數(shù)分裂前特異表達(dá)的基因[J]. 米美玲,楊蓓,徐斯凡,鄒挺.  中華男科學(xué)雜志. 2009(01)
[9]海藻糖和牛血清白蛋白對牛精液的冷凍效果[J]. 昝林森,張鶯鶯,耿繁軍,田萬強.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2008(10)
[10]小鼠精原細(xì)胞體外增殖與冷凍保存[J]. 李學(xué)家,王勇勝,劉鳳軍,劉軍,張涌.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2007(04)

碩士論文
[1]不同冷凍保護(hù)劑對未成熟小鼠睪丸組織的保護(hù)作用[D]. 王曉英.河北醫(yī)科大學(xué) 2010
[2]新生牛精原干細(xì)胞體外增殖調(diào)控的研究[D]. 張仕強.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007



本文編號：3294937