灘羊、小尾寒羊、湖羊、薩�？搜蚝偷驴巳麪栄蚓侨�、裘兼用的優(yōu)良綿羊品種。GPR54、LIN28和LIN28b基因的作用是調(diào)控綿羊繁殖性能和生長(zhǎng)速度;SCD基因的作用是調(diào)控綿羊脂肪沉積,影響肉品質(zhì)。分析這四個(gè)基因的多態(tài)性,并結(jié)合生產(chǎn)數(shù)據(jù)篩選優(yōu)良基因,繼而提高綿羊養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。對(duì)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,為提高綿羊繁殖性能、加快生長(zhǎng)發(fā)育速度和提高肉品質(zhì)奠定理論基礎(chǔ)。以5個(gè)品種的250只綿羊?yàn)檠芯繉?duì)象,應(yīng)用PCR-SSCP技術(shù)檢測(cè)四個(gè)基因的多態(tài)性。利用GenBank數(shù)據(jù)庫和各種分子生物學(xué)軟件,對(duì)四個(gè)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,預(yù)測(cè)其編碼產(chǎn)物的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)與功能。結(jié)果表明:1.GPR54基因出現(xiàn)1處突變位點(diǎn),位于第2內(nèi)含子的g.2958-24C>A顛換。2.LIN28基因出現(xiàn)2處突變位點(diǎn),分別位于第1內(nèi)含子的g.111+70C>G轉(zhuǎn)換和第4外顯子的g.46A>G同義突變。3.預(yù)測(cè)GPR54基因編碼產(chǎn)物的開放閱讀框長(zhǎng)1137 bp,編碼378個(gè)氨基酸殘基,為疏水性跨膜蛋白,無信號(hào)肽存在,二級(jí)結(jié)構(gòu)為Mixed型,主要在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上發(fā)揮生物學(xué)作用,在離子跨膜與信號(hào)傳遞過程中發(fā)揮重要作用。... 

【文章來源】：寧夏大學(xué)寧夏回族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－３引物Ｎ４梯度ＰＣＲ產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳??Ｆｉｇ．２－３?Ａｇａｒｏｓｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｆｒｏｍ?Ｍ４??

２．３．１基因組ＤＮＡ樣品的檢測(cè)??試驗(yàn)采用傳統(tǒng)的酚－氯仿抽提法從綿羊的血液組織中提取基因組ＤＮＡ，然后利用瓊脂糖凝膠??電泳檢測(cè)ＤＮＡ濃度。利用２?％的瓊脂糖凝膠檢測(cè)的結(jié)果見圖２－２，只有一條清晰的條帶，沒有明??顯的拖帶，說明ＤＮＡ沒有降解純度較高。分光光度計(jì)檢測(cè)ＤＮＡ濃度，２６０ｎｍ／２８０ｎｍ的結(jié)果為??１．８２，說明粗提的基因組ＤＮＡ無ＲＮＡ與蛋白質(zhì)污染。粗提的基因組ＤＮＡ質(zhì)量達(dá)到了后續(xù)試驗(yàn)??的要求。??圖２－２綿羊基因組ＤＮＡ瓊脂糖凝膠電泳??Ｆｉｇ．２－２?Ａｇａｒｏｓｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｇｅｎｏｍｉｃ?ＤＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｓｈｅｅｐ??２．３．２最適退火溫度??梯度ＰＣＲ后，利用２?％的瓊脂糖凝膠對(duì)ＰＣＲ產(chǎn)物進(jìn)行電泳，選擇最適退火溫度。圖２－３，引??物Ｍ４ＰＣＲ產(chǎn)物的電泳圖。??圖２－３引物Ｎ４梯度ＰＣＲ產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳??Ｆｉｇ．２－３?Ａｇａｒｏｓｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｆｒｏｍ?Ｍ４??從圖２－３可以看出第５泳道的條帶最亮，確定第５泳道對(duì)應(yīng)的溫度為最適退火溫度。所有引??物的最適退火溫度見表２－４。??表２－４最佳退火溫度??Ｔａｂｌｅ?２－４?Ｔｈｅ?ｂｅｓｔ?ａｎｎｅａｌｉｎｇ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ??基因ｇｅｎｅｓ?名稱ｎａｍｅ?退火溫度（°Ｃ）?Ｔｍ??ＰＩ?５８．０??Ｐ２?５０．１??ＧＰＲ５４?Ｐ３?５８．０??Ｐ４?５６．７??Ｐ５?５９．３??Ｍｌ?５６．０?

．３．３等位基因序列比對(duì)分析??與ＮＣＢＩ公布的綿羊ＧＰＲ５４基因序列（ＨＭ１３５３９３．１）進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)，Ｐ３引物擴(kuò)增片段多態(tài)第２內(nèi)含子中的一個(gè)核苷酸點(diǎn)突變?cè)斐傻模任换蛐蛄斜葘?duì)如圖２－６。等位基因Ａ在第子發(fā)現(xiàn)ｇ．２９５８－２４Ｃ＞Ａ顛換。??ＧｅｎＢａｎｋ．?ｓｅｑ?ＡＣＡＣＧＣＣＧＧＭＴＣＣＣＡＴＴＴＴＴＴＣＣＣＡＧＧＴＣＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧ?４０??ＡＡ．?ｓｅｑ???４０??ＡＢ．?ｓｅｑ?—ａ??４０??ＧｅｎＢａｎｋ．?ｓｅｑ?ＣＣＡＣＧＴＧＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＣＣＧＣＴＧ?８０??ＡＡ．?ｓｅｑ???８０??ＡＢ．?ｓｅｑ???８０??ＧｅｎＢａｎｋ．?ｓｅｑ?ＧＴＡＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＴＣＣＣＧＣＴＧＣＧＣＧＣＣＣＴＧＣＡＣＣＧＣＣＧＣ?１２０??ＡＡ．?ｓｅｑ???１２０??ＡＢ．?ｓｅｑ???１２０??ＧｅｎＢａｎｋ．?ｓｅｑ?ＡＣＧＣＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＧＣＴＧＧＣＡＧＴＣＡＧＣＣＴＣＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧ?１６０??ＡＡ．?ｓｅｑ???１６０??ＡＢ．?ｓｅｑ???１６０??ＧｅｎＢａｎｋ．?ｓｅｑ?ＴＧＧＧＴＧＡＧＴＴＣＡＧＣＡＴＧＧＧＧＧＴＣＧＣＡＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＡＧＡ?２００???

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3268401