擬態(tài)弧菌（Vibrio mimicus）是一種嚴(yán)重危害水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的腸道病原菌�？诜蚋刈⒒蛞呙缢ぐl(fā)的腸黏膜免疫在抗該菌感染中發(fā)揮重要作用。因此,研制安全、高效的擬態(tài)弧菌基因疫苗對于防控魚類擬態(tài)弧菌感染具有重要意義�；蛞呙缫园踩�、易于構(gòu)建、免疫應(yīng)答全面且持久等優(yōu)勢受到人們關(guān)注。但是,口服或肛注“裸”基因疫苗易受到消化道酶類降解,導(dǎo)致其免疫原性減弱,無法獲得高水平的腸黏膜免疫應(yīng)答,而解決這一問題的關(guān)鍵措施是選用適宜載體將基因疫苗靶向抗原遞呈細(xì)胞（Antigen Presenting Cell,APC）進(jìn)行高效表達(dá)與遞呈。目前,細(xì)菌菌蛻（Bacterial Ghosts,BGs）已被證實(shí)具有防止基因疫苗降解并將其靶向APC進(jìn)行表達(dá)的作用,而魚類恒定鏈類似蛋白（Invariant chain like protein,Iclp）具有將抗原肽靶向MHC分子,提高抗原提呈效率的作用。因此,可利用Iclp與BGs作為基因疫苗的內(nèi)、外靶向載體,以提高其免疫原性。前期研究中我們鑒定了擬態(tài)弧菌兩種免疫保護(hù)性蛋白（OmpU黏附素蛋白和VMH溶血素蛋白）的免疫優(yōu)勢表位。在此基礎(chǔ)上,本論文以O(shè)mpU蛋... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

擬態(tài)弧菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

-192RFADRDTSTGEFADNKEDGY）以不同方式進(jìn)行串聯(lián)組合，應(yīng)用DNAstar Protean軟件分析各種組合方式的可行性。發(fā)現(xiàn)以圖1-1方式串聯(lián)的多表位肽（命名為OVepis）中各表位間相對獨(dú)立，抗原性參數(shù)較好，可以作為疫苗靶點(diǎn)。將多表位肽OVepis序列轉(zhuǎn)化為核苷酸序列，從而獲得一個長度為324 bp的多表位串聯(lián)基因（OVepis基因）。委托通用生物技術(shù)有限公司合成OVepis基因，并克隆至質(zhì)粒pUC57形成重組克隆質(zhì)粒pUC57-OVepis。儀器名稱 型號 生產(chǎn)廠家超低溫保存箱 DW-86L-388A 海爾特種電器有限公司醫(yī)用低溫保存箱 DW-25W198 海爾特種電器有限公司臺式高速冷凍離心機(jī) Allegra 64R 美國貝克曼庫爾特公司冷場發(fā)射掃描電子顯微鏡 S-4800 日本日立公司透射電子顯微鏡 HT-7700 日本日立公司實(shí)時熒光定量 PCR 儀 ABI StepOne 美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司ADVENTURE 系列電子天平 AR223CN 奧豪斯儀器（常州）有限公司立式高壓蒸汽滅菌鍋 LDZX-30KBS 上海亞榮生化儀器廠超凈工作臺 SW-CJ-1F 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司電熱恒溫水槽 DK-8D 上海一恒科技有限公司力康 Heal Force Smart 超純水系統(tǒng) Smart-N UV/VF 力康生物醫(yī)療科技控股有限公司生物安全柜 ClassⅡBSC 新加坡藝思高科技有限公司生化培養(yǎng)箱 LRH-250 上海

血清與腸黏液中非特異性免疫因子活性檢測采集免疫前與免疫后 3 d、7 d、14 d、21 d，各實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)取 000 r/min，4 ℃離心 10 min，收集血清。同時根據(jù)草魚腸道開，清除糞便后用潔凈玻片小心刮取中、后腸段處的腸黏液勻漿，10 000 r/min，4 ℃離心 20 min，取上清即為待檢腸黏標(biāo)記，置于-80 ℃保存。圖 1-3 不同實(shí)驗(yàn)組某一組織中目的基因轉(zhuǎn)錄水平檢測的加樣示意圖 PBS 對照組、pcDNA3.1 對照組、雙靶向表位基因疫苗組、外靶向表位基因疫苗組和“裸”表位基因疫苗組。1-3 孔為目的基因，4-6 孔為內(nèi)參基因，7-8 孔為schematic diagram of sample addition for the detection of target gene transcriptional tissue of fish in different experimental groupsents PBS control group, pcDNA3.1 control group, double-targeted DNA argeted DNA vaccine group, endogenous-targeted DNA vaccine group and nakectively. 1-3 wells: target gene; 4-6 wells: reference gene; 7-8 wells: negative contrater.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3265377