發(fā)布時(shí)間：2021-07-04 19:04

　　狂犬病是由狂犬病病毒（RABV）引起的、以神經(jīng)系統(tǒng)感染為特征的高度致死性人獸共患病毒性傳染病。在RABV自然感染病例中出現(xiàn)典型的神經(jīng)癥狀，腦組織內(nèi)很難檢測(cè)到明顯的神經(jīng)元凋亡，但卻造成了神經(jīng)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)改變。神經(jīng)細(xì)胞骨架是維持神經(jīng)細(xì)胞正常生理功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。為研究神經(jīng)細(xì)胞骨架和RABV致病性的關(guān)系，本文以細(xì)胞骨架作為藥物靶點(diǎn)，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞骨架抑制劑對(duì)RABV感染細(xì)胞的影響，并結(jié)合對(duì)骨架調(diào)節(jié)蛋白的分析及構(gòu)建骨架蛋白融合熒光質(zhì)粒，研究RABV感染與細(xì)胞骨架動(dòng)態(tài)變化的關(guān)系。這些研究可為闡釋RABV感染致神經(jīng)功能異常提供理論依據(jù)，并為深入探究狂犬病致病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。本研究首先通過(guò)MTT法檢測(cè)秋水仙素（Col）和細(xì)胞松弛素D（CytoD）兩種骨架特異性抑制劑對(duì)人神經(jīng)瘤細(xì)胞SH-SY5Y活性影響，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、免疫熒光鑒定，初步篩選了兩種骨架特異性抑制劑的適宜濃度。隨后通過(guò)在RABV感染前后使用骨架抑制劑，應(yīng)用間接ELISA、RT-PCR、Western blotting及免疫熒光，分析兩種抑制劑對(duì)病毒感染和復(fù)制的影響。此外，還應(yīng)用Westernblotting對(duì)RABV感染條件下，兩種重要骨架... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

骨架抑制劑對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞活性的影響（X±S，n=6）

圖 1.2.1 不同濃度的 Col 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的影響Fig.1.2.1 Structural changes of SH-SY5Y cells under different concentrations Co注：A 為正常對(duì)照；B 為 0.13 mmol/LCol；C 為 0.25 mmol/LCol；D 為 0.5 mmol/LCol；Note: A. 0.1% DMSO B. 0.13mmol/L C.0.25mmol/L D.0.5mmol/L

圖 1.2.2 不同濃度的 CytoD 對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的影響Fig. 1.2.2 Structural changes of SH-SY5Y cells under different concentrations CytoD .注：E 為正常對(duì)照；F 為 0.5μg/mLCytoD；G 為 1μg/mLCytoD；H 為 2μg/mLCytoD；Note: A. 0.1% DMSO B. 0.5μg/mL C. 1μg/mL D. 2μg/mL1.2.2 免疫熒光鑒定結(jié)果對(duì)于 0.1%DMSO 處理的 SH-SY5Y，胞漿中微絲呈清晰明亮均勻的直線狀，呈纖維狀細(xì)長(zhǎng)的微絲沿著細(xì)胞長(zhǎng)軸方向排列，貫穿整個(gè)細(xì)胞并延伸到邊緣（圖1.3 A1）.微管?chē)@核周呈放射狀、密集網(wǎng)絡(luò)，微管分布與該細(xì)胞的長(zhǎng)梭型形態(tài)相一致（圖 1.3 A2）。此時(shí)微管、微絲的重疊區(qū)域也較大，細(xì)胞核間距較大，胞核呈長(zhǎng)橢圓形（圖 1.3 A3）。當(dāng) Col 的濃度為 0.065mmol/L 時(shí)，盡管微管分布與 0.1%DMSO 處理組差異不大，但長(zhǎng)度有所變短，核形態(tài)變化不大（圖 1.3 B2、B3）；當(dāng) Col 的濃度為0.13mmol/L 時(shí)，微管長(zhǎng)度有所縮短，僅在核周聚集成束并形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，胞核

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]α-皰疹病毒與宿主細(xì)胞骨架相互作用的研究進(jìn)展[J]. 劉超,邱亞峰,馬志永.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2010(01)
[2]我國(guó)狂犬病流行狀況分析及防治對(duì)策[J]. 羅明,張茂林,涂長(zhǎng)春.  中國(guó)人獸共患病雜志. 2005(02)
[3]測(cè)定細(xì)胞存活和增殖的MTT方法的建立[J]. 鄭永唐,賁昆龍.  免疫學(xué)雜志. 1992(04)



本文編號(hào)：3265364