PRDM1（positive regulatory domain1）是一個(gè)具有典型正性調(diào)控結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子,已經(jīng)在許多物種中得到鑒定,并且在細(xì)胞生長、分化,胚胎發(fā)育中有重要影響。此外,PRDM1是小鼠生殖細(xì)胞特化的關(guān)鍵因子。然而,鳥類胚胎發(fā)育中PRDM1的表達(dá)模式和功能還沒有充分研究,鳥類生殖細(xì)胞的起源也尚未定論。因此,我們研究雞發(fā)育過程中各個(gè)組織尤其是生殖系中PRDM1的時(shí)空表達(dá),并研究其過表達(dá)對雞胚發(fā)育和DF-1細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。我們的結(jié)果表明prdm1mRNA表達(dá)于雞的胚盤細(xì)胞和各個(gè)組織,包括：肝、皮、肺、腎、眼、法氏囊、脾臟、腺胃、肌胃、腸、睪丸、卵巢、舌、羽毛和胸腺。但是在大腦,心臟,骨骼肌中幾乎檢測不至\\prdml mRNA的表達(dá)。在所有檢測的組織中,第X期的胚盤細(xì)胞中prdml mRNA的表達(dá)水平最高。許多組織的發(fā)育過程中prdm1mRNA的表達(dá)水平有顯著變化,比如胚盤、法氏囊、脾、羽毛和生殖系。此外,Western blot和免疫組織化學(xué)檢測PRDM1蛋白的表達(dá)結(jié)果基本一致,并且和mRNA結(jié)果類似,肌胃除外。免疫組化檢測結(jié)果顯示PRDM1位于平滑肌中。另外... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
縮略詞
第一章 引言
    1.1 PRDM1基因簡介
        1.1.1 PRDM1基因的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 PRDM1基因的表達(dá)與功能
        1.1.3 PRDM1作用的分子機(jī)制
        1.1.4 雞PRDM1簡介
    1.2 鳥類發(fā)育生物學(xué)
        1.2.1 雞卵子的發(fā)育
        1.2.2 雞胚胎的早期發(fā)育
        1.2.3 雞生殖細(xì)胞系的發(fā)育
    1.3 雞胚的遺傳操作
        1.3.1 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法
        1.3.2 慢病毒載體法
    1.4 DF-1細(xì)胞系簡介
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及種蛋
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 試劑及耗材
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 方法
        2.2.1 樣本采集
        2.2.2 總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 RT-PCR
        2.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR
        2.2.5 Western blot
        2.2.6 免疫組化
        2.2.7 免疫熒光
        2.2.8 PAS染色
        2.2.9 Prdm1基因的克隆
        2.2.10 慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.11 慢病毒包裝及滴度檢測
        2.2.12 微注射玻璃針的準(zhǔn)備
        2.2.13 顯微注射慢病毒載體
        2.2.14 組織DNA的提取
        2.2.15 表達(dá)載體pEGFP-N1-PRDM1的構(gòu)建
        2.2.16 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.17 脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染細(xì)胞
        2.2.18 統(tǒng)計(jì)
        2.2.19 引物列表
第三章 PRDM1在雞胚和生殖細(xì)胞系發(fā)育中的表達(dá)
    3.1 背景
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 胚盤/胚胎和各組織中prdml mRNA的檢測
        3.2.2 Prdm1 mRNA的定量分析
        3.2.3 不同組織中PRDM1蛋白的表達(dá)與定位
        3.2.4 PRDM1是性腺中生殖細(xì)胞和血液PGCs的標(biāo)志
        3.2.5 胚盤細(xì)胞中PRDM1蛋白的定位
    3.3 討論
第四章 PRDM1過表達(dá)對雞胚發(fā)育的影響
    4.1 背景
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 慢病毒表達(dá)載體GV208-PRDM1的構(gòu)建
        4.2.2 顯微注射慢病毒載體后胚胎存活率和出雛率統(tǒng)計(jì)結(jié)果
        4.2.3 顯微注射慢病毒表達(dá)載體后雞胚各組織中熒光檢測
        4.2.4 顯微注射慢病毒表達(dá)載體后雞胚中外源性prdm1的DNA檢測
        4.2.5 顯微注射慢病毒表達(dá)載體后雞胚中外源性prdm1 mRNA的檢測
    4.3 討論
第五章 DF-1細(xì)胞中PRDM1過表達(dá)誘導(dǎo)G0/G1期停滯
    5.1 背景
    5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.2.1 pEGFP-N1-PRDM1表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.2 PRDM1定位于DF-1細(xì)胞的細(xì)胞核
        5.2.3 DF-1細(xì)胞中prdm1的過表達(dá)
        5.2.4 PRDM1過表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞周期G0/G1期停滯
        5.2.5 p53及p53相關(guān)基因的表達(dá)
        5.2.6 Rb通路相關(guān)基因的表達(dá)
        5.2.7 細(xì)胞周期蛋白基因的表達(dá)
        5.2.8 PRDM1過表達(dá)抑制DF-1增殖并改變細(xì)胞形態(tài)
    5.3 討論
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    Prdm1 cDNA序列
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雛雞品質(zhì)影響的因素及雛雞出殼的注意事項(xiàng)[J]. 婁艷.  養(yǎng)殖技術(shù)顧問. 2013(12)
[2]基因沉默的研究進(jìn)展[J]. 陳雪梅,杜顯剛,譚志巍,王亞琴,官鵬.  法律與醫(yī)學(xué)雜志. 2005(03)
[3]在代用蛋殼中孵化雞胚[J]. 李贊東,杜國清,周順伍,齊順章.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 1994(06)



本文編號：3265355