本文關(guān)鍵詞：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇檢測方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：畜產(chǎn)品安全是目前養(yǎng)殖業(yè)關(guān)注的一個熱點,把控好畜產(chǎn)品安全的每一關(guān)都至關(guān)重要。霉菌毒素對動物和人類的健康構(gòu)成了巨大威脅。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇又名嘔吐毒素,其被認(rèn)為是谷物或飼料中常見的最危險的霉菌毒素之一,并且在全球范圍內(nèi)嘔吐毒素污染谷物和飼料的狀況最為常見,形勢較為嚴(yán)峻。該毒素可引起急性、慢性、細(xì)胞性以及生殖毒性,對動物和人的健康造成很大威脅。且目前市場上常用的檢測法,如膠體金快速檢測試紙條、ELISA檢測試劑盒質(zhì)量參差不齊,急需改進(jìn)并尋求新的檢測法應(yīng)用于臨床。本文研究建立了兩種方法用于脫氧雪腐鐮刀菌烯醇毒素的殘留檢測,并在基礎(chǔ)上完成了試劑盒的制備,為飼糧中嘔吐毒素的檢測提供了依據(jù)。兩種嘔吐毒素殘留檢測的方法,分別為酶聯(lián)免疫檢測法和化學(xué)發(fā)光酶免檢測法。首先對各反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化:1、通過棋盤法確定了抗原抗體的最適工作比例;2、對兩種檢測法的緩沖體系與反應(yīng)模式進(jìn)行優(yōu)化,確立了各種反應(yīng)條件與模式;3、通過以上條件的篩選最終建立合適的標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定了最低檢測限;4、對以上建立的方法做添加回收實驗,篩選合適的回收方法;5、對兩種檢測法的各種性能指標(biāo)進(jìn)行檢測,包括準(zhǔn)確性、精密性、穩(wěn)定性以及是否存在交叉反應(yīng)等,如有必要再對之前的各條件進(jìn)行優(yōu)化,最終建立一個完整的檢測嘔吐毒素的間接競爭檢測方法。經(jīng)過優(yōu)化后,最終確定嘔吐毒素酶免檢測試劑盒的檢測限(IC15)為10 ppb,線性范圍為10-810 ppb,試劑盒的檢測靈敏度為60.9 ppb;做12種樣品的添加回收實驗,回收率在88.7%-116.3%,批內(nèi)變異在2.14%-9.97%,批間差異最高為10.82%,且試劑盒的穩(wěn)定性很好,整體變幅在30%以內(nèi)。嘔吐毒素化學(xué)發(fā)光酶免疫檢測方法的檢測限為0.5 ppb,靈敏度為1.47 ppb,檢測范圍為0.5-40.5 ppb,同樣做12中谷物與飼料樣品的添加回收實驗,回收率在78%-118%之間,批內(nèi)與批間變異均控制在15%以內(nèi)。穩(wěn)定性檢測結(jié)果整體變幅在30%以內(nèi)。實驗表明兩種試劑盒均可用于樣品的檢測,化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法可更明顯提高嘔吐毒素試劑盒的檢測限和靈敏度。
【關(guān)鍵詞】：嘔吐毒素 殘留檢測 化學(xué)發(fā)光酶免檢測試劑盒 酶聯(lián)免疫試劑盒
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S816.17
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-18
• 1.1. 嘔吐毒素概述10-15
• 1.1.1. 嘔吐毒素理化性質(zhì)10
• 1.1.2. 嘔吐毒素的毒性作用10-12
• 1.1.3. 嘔吐毒素檢測方法的研究現(xiàn)狀12-15
• 1.2. 化學(xué)發(fā)光免疫分析方法15-18
• 1.2.1. 化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理15
• 1.2.2. 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析的應(yīng)用15-18
• 第二章 嘔吐毒素ELISA分析方法的建立18-32
• 2.1. 實驗材料18-21
• 2.1.1. 試劑與藥品18-19
• 2.1.2. 溶液配制19-20
• 2.1.3. 儀器設(shè)備20-21
• 2.2. 實驗方法21-24
• 2.2.1. 方法的建立21-22
• 2.2.2. 方法的評價22-24
• 2.3. 結(jié)果與分析24-30
• 2.3.1. ELISA方法的建立與優(yōu)化24-27
• 2.3.2. ELISA方法的評價27-30
• 2.4. 討論30-31
• 2.4.1. 關(guān)于ELISA試劑盒方法的建立30
• 2.4.2. 關(guān)于ELISA試劑盒方法的評價30-31
• 2.5. 小結(jié)31-32
• 第三章 嘔吐毒素化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法的建立32-45
• 3.1 實驗材料32
• 3.1.1 試劑與藥品32
• 3.1.2 溶液配制32
• 3.1.3 儀器設(shè)備32
• 3.2 實驗方法32-36
• 3.2.1 方法的建立32-34
• 3.2.2 方法的評價34-36
• 3.3 結(jié)果與分析36-43
• 3.3.1 CLEIA方法的建立與優(yōu)化36-40
• 3.3.2 CLEIA方法的評價40-43
• 3.4 討論43-44
• 3.5 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 致謝51-52
• 作者簡介52

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李曉楠;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇檢測方法的建立[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇檢測方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：326064