發(fā)布時(shí)間：2021-06-26 17:25

　　苦豆草具有清腸,燥濕的功效,中獸醫(yī)臨床用于治療畜禽濕熱瀉痢,里急后重及淋證澀痛等,但其作用機(jī)制尚不完全清楚。本研究以苦豆草為研究對(duì)象,采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定苦豆草中5種生物堿的含量;在此基礎(chǔ)上建立大腸濕熱證大鼠模型后應(yīng)用苦豆草進(jìn)行干預(yù)治療,采用代謝組學(xué)策略從機(jī)體內(nèi)源性代謝小分子層面探究苦豆草治療大腸濕熱證的作用機(jī)制。該研究為苦豆草治療畜禽大腸濕熱證藥理作用及臨床應(yīng)用提供了基礎(chǔ)研究資料和理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1、苦豆草中5種生物堿化學(xué)成分含量測(cè)定采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈色譜柱（4.6×150 mm,5μm）,以甲醇-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相,柱溫35℃,波長(zhǎng)205 nm梯度洗脫。通過(guò)考察線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性及加樣回收實(shí)驗(yàn)等,顯示所建立的苦豆草中5種生物堿含量測(cè)定方法可靠;并用此方法測(cè)定苦豆草中苦參堿、槐果堿、槐定堿、氧化槐果堿及氧化苦參堿含量分別為0.03%、0.03%、0.30%、0.18%及0.26%,其中以槐定堿含量最高。2、大腸濕熱證模型建立和苦豆草干預(yù)治療效果探究Wistar大鼠32只,隨機(jī)分為對(duì)照組（... 

【文章來(lái)源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：91 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

苦豆草中主要生物堿化學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖

再分別取適量單個(gè)對(duì)照品溶液，混合制備成終濃度約為 0.1 mg·mL-1的混合對(duì)照品母液。使用時(shí)稀釋至所需濃度，經(jīng) 0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾。2.2.2 苦豆草樣品溶液制備稱取苦豆草粗粉 0.2g，加 20mL三氯甲烷和 1mL濃氨水，超聲處理 30min，置 4℃條件下 12h，抽濾，水浴蒸干，加流動(dòng)相定容至 10mL，超聲處理 30min，補(bǔ)足缺失量，用 0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾，制得苦豆草樣品溶液。2.3 方法學(xué)考察2.3.1 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)按照2.1的色譜條件，分別取混合對(duì)照品溶液及苦豆草樣品溶液20μL進(jìn)樣，測(cè)定其含量，可見(jiàn)各生物堿成分分離效果良好，基線平穩(wěn)，其中苦參堿，槐果堿，槐定堿，氧化槐果堿，氧化苦參堿的保留時(shí)間分別為：9.565 min，11.774 min，13.098 min，17.245 min 和 21.054 min（圖 2-1，2-2）。

圖 2-2 苦豆草樣品 HPLC 圖譜Figure 2-2 The HPLC chromatogram of Sophora alopecuroides.2.3.2 線性關(guān)系考察精密量取混合對(duì)照品母液，分別稀釋成質(zhì)量濃度為 0.005 mg·mL-1，0.01mg·mL-1， 0.02mg·mL-1，0.04mg·mL-1，0.08mg·mL-1的混合對(duì)照品，計(jì)算出每個(gè)濃度下單個(gè)對(duì)照品的質(zhì)量濃度，按 2.1 的色譜條件測(cè)定峰面積，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，得苦參堿、槐果堿、槐定堿、氧化槐果堿及氧化苦參堿的線性回歸方程（表 2-1，圖 2-3）。其中苦參堿線性范圍為：1.20 μg·mL-1～19.24μg·mL-1；槐果堿線性范圍：0.67μg·mL-1～10.67μg·mL-1；槐定堿線性范圍為：1.17μg·mL-1～18.67μg·mL-1；氧化槐果堿線性范圍為：0.84μg·mL-1～13.33μg·mL-1；氧化苦參堿線性范圍為：1.13 μg·mL-1～18.10 μg·mL-1。表 2-1 苦豆草中 5 種生物堿線性回歸方程測(cè)定結(jié)果Table 2-1 The linear regression equation results of 5 alkaloids in Sophora alopecuroides

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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