為建立一種檢測牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）抗體的ELISA方法,對E^rns蛋白一個包含2個預(yù)測抗原表位的96氨基酸蛋白編碼序列,經(jīng)密碼子優(yōu)化后進(jìn)行基因合成,構(gòu)建重組表達(dá)載體pET-E_84-170aa^rns,轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株BL21（DE3）,在28℃用0.1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)。將重組E_84-170aa^rns蛋白通過Ni²⁺-NTA樹脂親和層析方法純化后,用Western-blot分析其抗原性。結(jié)果顯示,重組E_84-170aa^rns蛋白以完全可溶形式在大腸桿菌中高效表達(dá),經(jīng)Ni²⁺-NTA樹脂純化獲得重組E_84-170aa^rns蛋白的濃度和純度分別為1.5 mg/mL和94%。Western-blot顯示,該重組蛋白對BVDV陽性血清具有很強的抗原反應(yīng)性。用純化的重組E_84-170aa^rns

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(10)北大核心CSCD

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重組Erns84-170aa蛋白的Western-blot分析

450，N；下同。P：Positiveserum；N：Negativeserum；P/N=D450，P/D450，N；Thesameasfollows.表1最適抗原包被濃度和血清稀釋度的確定Table1Determinationofthecoatingconcentrationofantigenandthedilutionofserumsamples圖2重組Erns84-170aa蛋白的Western-blot分析Figure2Western-blotanalysisofrecombinantErns84-170aaprotein1：預(yù)染蛋白Marker；2～3：重組Erns84-170aa蛋白。1：Prestainedmolecularweightmarker；2—3：RecombinantErns84-170aaprotein.圖1重組Erns84-170aa蛋白在大腸桿菌表達(dá)及純化的SDS-PAGE分析Figure1SDS-PAGEanalysisoftheexpressionofErns84-170aarecombinantplasmidinE.coliandpurifiedrecom-binantErns84-170aaprotein1：蛋白Marker；2：未誘導(dǎo)菌體裂解物；3：重組表達(dá)菌誘導(dǎo)后菌體裂解物；4：重組表達(dá)菌誘導(dǎo)后菌體裂解物上清；5～8：純化的重組蛋白。1：Prestainedmolecularweightmarker；2：TheuninducedBL21（DE3）cellsharbouringtherecombinantplasmid；3：TheinducedBL21（DE3）cellsharbouringtherecombinantplasmid；4：ThesupernatantaftersonicationoftheBL21（DE3）cellsexpressingErns84-170aa；5—8：Thepuri-fiedrecombinantErns84-170aaprotein.值（5.93）最大且陽性血清D450≥1.0。2.6酶標(biāo)抗體最佳工作濃度確定結(jié)果如表3所示，當(dāng)酶標(biāo)二抗選擇1∶5000濃度時，P/N值（5.69）最大且陽性血清D450≥1.0。2.7陰陽性臨界值判定標(biāo)準(zhǔn)確定結(jié)果如表4所示，40份陰性樣品的平均D450值為0.214，S值為0.023，陰性樣品值的上

特異性檢測Figure3SpecificitytestBVDVIBRV陽BLV陽性BTV陽性血AKAV陽性血

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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